单链抗体融合人血白蛋白对重症肌无力致病性抗乙酰胆碱受体抗体的抑制

论文摘要

目的:研究单链抗体融合人血白蛋白（HSA-ScFv）在体外对重症肌无力（MG）的治疗作用。方法:将携带有高拷贝重组基因表达载体的毕赤酵母菌GS115菌株复苏后,用YPD培养基传代培养,再经BMGY、BMMY表达培养基培养3天,每24小时添加100%甲醇使甲醇终浓度为1%诱导表达。培养基上清液室温经14 000 g离心后,利用斑点杂交试验（dot blot）初步判定上清液中的融合蛋白;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析融合蛋白的分子量;蛋白印迹（western blot）实验进一步确定表达蛋白的特异性;应用竞争性ELISA测定法对HSA-ScFv抑制MG患者血清与人乙酰胆碱受体（AChR）结合率及表达产物稳定性进行测定。结果:HSA-ScFv637对MG患者血清与人AChR结合的抑制率可达77.4%,其对AChR的这种保护能力可持续3天,随着样品的衰变HSA-ScFv637保护作用减弱至消失。结论:HSA-ScFv637在体外能抑制致病性抗AChR抗体与AChR的结合,对AChR具有保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 实验材料
• 2.1 实验仪器
• 2.2 实验试剂
• 2.3 菌种和肌肉组织
• 2.4 培养基的制备
• 2.5 溶液的配制
• 第三章 实验方法
• 3.1 复苏菌种
• 3.2 诱导表达
• 3.3 表达产物的一般特性鉴定
• 3.4 HSA-ScFv637抑制 MG患者血清中相应抗体与人AChR结合活性测定
• 3.5 HSA-ScFv637体外血中稳定性测定
• 第四章 结果
• 4.1 斑点杂交试验检测蛋白
• 4.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酞胺凝胶电泳
• 4.3 蛋白印迹实验
• 4.4 HSA-ScFv637抑制MG患者血清中相应抗体与人AChR结合活性测定
• 4.5 HSA-ScFv637体外血中稳定性
• 第五章 讨论
• 5.1 影响蛋白表达的因素
• 5.2 斑点杂交试验检测融合蛋白
• 5.3 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测融合蛋白蛋白印迹实验检测目的蛋白
• 5.4 ELISA抑制实验及稳定性实验
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献