论文摘要
目的：通过采用高脂饲料喂养SHR结合维生素D3腹腔注射成功建立AS模型，运用AFM观察AS不同时间SHR主动脉内皮细胞膜超微结构的变化，同时探讨丙丁酚联合阿托伐他汀干预对AS形成过程中SHR主动脉内皮细胞膜超微结构的影响。方法：92只12周龄雄性SHR随机分为5组，正常对照组12只（普通饲料喂养）、模型组20只（高脂饲料喂养）、丙丁酚组20只（高脂饲料喂养、丙丁酚150mg／kg.d灌胃）、阿托伐他汀组20只（高脂饲料喂养、阿托伐他汀10mg／kg.d灌胃）、联合干预组20只（高脂饲料喂养、丙丁酚150mg／kg.d+阿托伐他汀10mg／kg.d灌胃）。另取12只同源同周龄雄性京都种WKY大鼠作为阴性对照组（普通饲料喂养）。实验开始前给予模型组和药物组每只大鼠维生素D370万U／kg一次性腹腔注射。于实验开始前每组随机抽取10只大鼠，空腹抽取眼眶后静脉丛血液行有关化验，并于实验第4、8周末随机处死6-10只大鼠，直接心脏取血，测定有关指标，同时取胸主动脉弓处血管行HE染色，光镜下观察病理变化，另取胸主动脉下段血管制作标本运用AFM观察内皮细胞膜表面纳米水平的形态结构变化。结果：1．WKY对照组和SHR对照组血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平在实验前后均无明显变化（P＞0.05）。实验4、8周末，模型组和药物组血清TC、LDL-C、HDL-C较实验前及对照组明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，联合组血清TC、LDL-C下降最显著（P＜0.01），丙丁酚组与阿托伐他汀组下降亦显著（P＜0.05）；模型组血清HDL-C水平明显高于药物组（P＜0.01）。各组血清TG水平实验前后均无明显变化（P＞0.05）。2．血清NO、ET-1、ox-LDL含量变化：实验8周末，与对照组比较，模型组和药物组血清NO、ET-1和ox-LDL均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，药物组血清NO明显升高（P＜0.05），而血清ET-1和ox-LDL均明显降低（P＜0.05）；药物组间血清NO、ET-1及ox-LDL无显著性差异（P＞0.05）。3．光镜下观察：WKY对照组和SHR对照组主动脉内膜较薄而光滑，染色均匀，内皮完整，内皮下细胞排列整齐，无脂质沉积。随时间延长，模型组病变最重，8周末可见主动脉内膜表面内皮细胞脱落，内膜增厚、隆起，内皮下间隙明显增宽，中膜平滑肌细胞增生，排列紊乱，弹力纤维层不呈平行状排列。联合干预组病变最轻，内膜轻度增厚，内皮细胞基本完好，内皮下间隙未见明显增宽，中膜平滑肌细胞增生不明显，弹力纤维层排列排列基本规则。丙丁酚组和阿托伐他汀组病变介于上述两者之间。4．AFM观察：WKY对照组和SHR对照组主动脉内皮细胞排列规整，走行一致，表面由大小较一致的圆形或椭圆形隆起组成，排列均匀，界限清晰。模型组随时间延长，内皮细胞形态逐渐不规则，走行混乱，表面小球样隆起逐渐融合成片状，大小不一，排列不规则，界限模糊。药物组随时间延长细胞膜表面结构也发生变化，但与模型组相比，更接近对照组，以联合组最接近。模型组和药物组内皮细胞膜平均粗糙度均显著高于对照组（P＜0.01）；模型组明显高于药物组（P＜0.01）。结论：1．高脂饲料喂养SHR结合维生素D3腹腔注射能引起血清TC、LDL-C明显升高，并引起AS病变。1．AFM可以清楚地观察到AS时主动脉内皮细胞膜超微结构的变化，是一种观察膜形态结构的良好工具。2．在AS发生发展过程中，主动脉内皮细胞膜呈现动态改变，提示内皮细胞受损可能是AS发生发展过程中的始动和关键因素。3．丙丁酚、阿托伐他汀既可降低血脂，增加NO生成、减少ET-1及抑制ox-LDL形成，还能保护内皮细胞超微结构，发挥抗AS的作用，二者联合应用效果更佳。