论文摘要
食管癌是严重危害人类健康的常见消化道恶性肿瘤之一,其发病率在世界上位居恶性肿瘤的第七位,死亡率位于第六位。中国是食管癌的高发区,诊断的食管癌中90%是食管鳞状细胞癌（ESCC）。目前关于ESCC发生的机制还不清楚,本研究旨在探讨食管癌相关基因4（ECRG4）在ESCC发生中的作用。ECRG4是我室克隆和鉴定的新基因,并在Genbank（AF 268198）登记。激光扫描共聚焦显微镜成像显示,内源性和外源性ECRG4蛋白主要定位在细胞质和细胞膜。Western blot方法在细胞无血清培养液中检测到ECRG4蛋白存在,提示ECRG4可能是分泌蛋白。我们制作了特异识别ECRG4蛋白的兔多克隆抗体,通过ESCC组织芯片以免疫组织化学和Western blot方法,分析了130对食管癌与癌旁组织,发现在68.5%（89/130）的ESCC组织中ECRG4蛋白表达下调。抑癌基因在肿瘤组织表达下调常常是由于其启动子高甲基化,而我们用去甲基化药物5-aza-2’-deoxycytidine处理可以恢复EC9706细胞ECRG4 mRNA的表达,说明启动子高甲基化可能是ECRG4在ESCC转录失活的主要机制。ECRG4蛋白表达下调与ESCC局部淋巴结转移、原发肿瘤大小和临床病理分期成正相关（P＜0.05）。ECRG4蛋白表达与ESCC病人的术后生存时间成正相关,是ESCC的独立预后指标（P＜0.05）。ECRG4基因转染到EC9706细胞能抑制细胞增殖、平板克隆形成率、软琼脂克隆形成率、细胞周期进展和裸鼠移植瘤生长（P＜0.05）。纯化的重组ECRG4蛋白可以体外抑制EC9706细胞的增殖,抑制率随着ECRG4蛋白浓度增加而升高,成剂量-效应关系（P＜0.05）。ECRG4基因转染到EC9706细胞,可以抑制EC9706细胞NF-κB的表达和核转位,以及NF-κB靶基因COX-2的表达。我们的研究结果表明,ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4蛋白是预测ESCC预后的候选标志物。启动子高甲基化可能是ECRG4在ESCC转录失活的主要机制。ECRG4可能通过参与NF-κB通路调控COX-2的表达来发挥其抑癌功能。ECRG4重组蛋白可以作为ESCC的潜在治疗药物。