论文摘要
目的:心肌再灌注治疗挽救缺血心肌的同时,心肌恢复血流可能加重缺血造成的损伤,即引起缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI ）。近年来研究表明,心肌细胞凋亡也是心肌细胞的一种重要的死亡形式,在MIRI病理生理过程中发挥着重要作用,与梗死灶的发展有关。Rho激酶介导了细胞凋亡。本研究通过建立大鼠心肌缺血再灌注模型,观察缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的情况,以评价不同剂量Rho激酶抑制剂（法舒地尔Fasudil）对大鼠I/R后心肌的保护作用。方法:健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠,普通饲料适应性喂养1周后,随机分为5组,即假手术组（Sham）:大鼠开胸暴露左冠状动脉,穿线但不作结扎,于穿线30分钟后腹腔内注射生理盐水0.5ml,观察165分钟;缺血再灌注组（ischemia reperfusion,I/R）:收紧结扎线阻断冠状动脉左前降支缺血45分钟,于再灌注前15分钟腹腔内注射生理盐水0.5ml,放松结扎线再灌注120分钟;法舒地尔大剂量治疗组（HDF）:收紧结扎线阻断冠状动脉左前降支缺血45分钟,于再灌注前15分钟腹腔内给予法舒地尔（30mg/kg）,放松结扎线再灌注120分钟;法舒地尔中剂量治疗组（IDF）:收紧结扎线阻断冠状动脉左前降支缺血45分钟,于再灌注前15分钟腹腔内注射法舒地尔（10mg/kg）,放松结扎线再灌注120分钟;法舒地尔小剂量治疗组（LDF）:收紧结扎线阻断冠状动脉左前降支缺血45分钟,于再灌注前15分钟腹腔内注射法舒地尔（5mg/kg）,放松结扎线再灌注120分钟;再灌注120分钟后再次阻断冠状动脉血流,伊文蓝-红四氮唑双染色,常规HE染色,TUNEL法检测缺血区凋亡细胞,免疫组织化学染色法检测缺血区Bcl-2和Bax的表达。结果:1心肌组织形态学变化假手术组大鼠心肌纤维排列规则,结构清晰,细胞核呈椭圆型,心肌细胞之间间隙紧密,细胞形态学表现基本正常;I/R组可见大量心肌细胞变性、心肌组织水肿,病理改变程度较HDF组、IDF组及LDF组大鼠的明显加重;HDF组较IDF组及LDF大鼠心肌病理改变程度轻;IDF组大鼠心肌病理改变程度与LDF组相当。2心肌细胞凋亡情况与Sham组相比,I/R组、LDF组、IDF组及HDF组缺血区心肌细胞凋亡指数均显著升高,且差别有统计学意义（P<0.01）;与I/R组相比,LDF组、IDF组及HDF组心肌细胞凋亡指数均显著降低,且差别有统计学意义（P<0.01）;HDF组与IDF组、LDF组比较心肌细胞凋亡指数显著降低,差别均有统计学意义（P<0.01）;IDF组和LDF组比较心肌细胞凋亡指数无明显差异,差别无统计学意义（P> 0.05）。3 Bcl-2基因蛋白的表达情况与Sham组相比,I/R组、LDF组、IDF组及HDF组缺血区心肌细胞Bcl-2蛋白的表达均显著降低,且差别有统计学意义（P<0.01）;与I/R组相比,LDF组、IDF组及HDF组Bcl-2蛋白的表达均显著升高,且差别有统计学意义（P<0.01）;HDF组与IDF组、LDF组比较Bcl-2蛋白的表达显著升高,差别均有统计学意义（P<0.01）;IDF组和LDF组比较Bcl-2蛋白的表达无明显差异,差别无统计学意义（P>0.05）。4 Bax基因蛋白的表达情况与Sham组相比,I/R组、LDF组、IDF组缺血区心肌细胞Bax蛋白的表达均显著升高,且差别有统计学意义（P<0.01）;与Sham组相比,HDF组缺血区心肌细胞Bax蛋白的表达也显著升高（P<0.05）;与I/R组相比,LDF组、IDF组及HDF组Bax蛋白的表达均显著降低,且差别有统计学意义（P<0.01）;HDF组和IDF组、LDF组比较Bax蛋白的表达均显著降低,差别均有统计学意义（P<0.01）;IDF组和LDF组比较Bax蛋白的表达无明显差异,差别无统计学意义（P >0.05）。结论:本研究对I/R大鼠应用不同剂量法舒地尔干预,结果显示法舒地尔具有以下作用:1提高I/R缺血区Bcl-2的表达。2降低I/R缺血区Bax的表达。3减少I/R后缺血区细胞凋亡水平。以上作用与剂量相关,以大剂量应用时心肌保护作用更强。初步提示法舒地尔对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与上调Bcl-2基因蛋白表达、抑制Bax基因蛋白表达有关。