碘化-N-正丁基氟哌啶醇对缺血再灌注状态下心肌细胞肌浆网钙泵的保护作用

论文摘要

心肌肌浆网Ca2+-ATPase酶( sarco /endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA )在心肌细胞中含量丰富,心肌舒张时大多数钙离子的转移由SERCA完成,在心肌钙稳态的调节中发挥重要作用。SERCA活性降低,一方面引起肌浆网钙离子摄取速度减慢和摄取量减少,导致心肌舒张缓慢和舒张不完全;另一方面导致肌浆网腔内贮存钙离子水平下降,影响肌浆网钙释放通道雷诺丁受体（RyRs）的活性,导致心肌兴奋-收缩耦联障碍,心肌收缩功能降低。碘化-N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide,F2）是我课题组设计合成的一种新型钙通道阻滞剂。前期研究表明F2对心肌缺血再灌注（ischemia reprefusion,I/R）损伤以及心肌细胞的缺氧-复氧损伤有明显的保护作用。其作用靶点是阻断心肌细胞、平滑肌细胞上的L-型钙通道,拮抗钙超载。但对心肌细胞内SERCA这样一个维持细胞内钙稳态,影响钙超载的重要酶的研究尚未进行,因此本论文主要探讨F2对I/R状态下心肌细胞内SERCA功能的影响。在建立大鼠心肌缺血再灌注模型的基础上,通过测定SERCA活性和蛋白表达的变化,进一步探讨F2对心肌损伤的保护作用及机制。方法1.心肌缺血再灌注模型的建立:根据实验需要设立缺血不同时间组及再灌不同时间组,分别为:缺血30min,再灌注0min、30min、60min（实验正在进行中）和120min及缺血60min,再灌注30 min。结扎成年SD大鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血,解除结扎即为再灌注。2.实验分组:成年SD大鼠随机分成七组:假手术（Sham）组、不同时间I/R组、F2不同剂量组:0.25mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg,2mg/kg和4mg/kg。实验结束后,取结扎线以下左心室缺血心肌组织进行测定。3. Western-blot方法检测左心室缺血心肌组织匀浆SERCA蛋白表达的变化,比色法测心肌组织SERCA-ATPase分解ATP生成ADP及无机磷的含量,判断其活性的变化。结果1. F2对I/R状态下心肌细胞SERCA活性的影响与Sham组相比,I/R状态下SERCA的活性下降,不同剂量F2:0.25 mg/kg、0.5 mg/kg、1mg/kg,2mg/kg和4 mg/kg,可量效依赖地改善I/R引起的SERCA的活性下降。2. F2对I/R状态下心肌细胞SERCA蛋白表达的影响。Western-blot结果显示:缺血30min,再灌注0min、30min和120min及缺血60min,再灌注30min SERCA蛋白表达量均未发生变化。实验中不同剂量F2对SERCA蛋白表达均未影响。结论:1.心肌缺血及再灌注可导致SERCA活性下降,但其蛋白表达未发生变化。2.F2可剂量依赖性地改善I/R状态下SERCA的活性,这可能是F2发挥心肌保护作用的另一重要机制。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 第一部分 碘化-N-正丁基氟哌啶醇对缺血30min 再灌注不同时间大鼠心肌细胞肌浆网钙泵活性的影响
• 1.1 材料与方法
• 1.2 实验结果
• 第二部分 碘化-N-正丁基氟哌啶醇对缺血30min 再灌注不同时间大鼠心肌细胞肌浆网钙泵蛋白含量的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.2 实验结果
• 第三部分 碘化-N-正丁基氟哌啶醇对缺血60min 再灌注30min 大鼠心肌细胞肌浆网钙泵的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.2 实验结果
• 第四部分 讨论
• 4.1 I/R 状态下SERCA 的变化
• 4.2 SERCA 活性的观察方法
• 2对缺血再灌注状态下SERCA 的保护作用机制'>4.3 F₂对缺血再灌注状态下SERCA 的保护作用机制
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 简历
• 附录
• 致谢