雷公藤多甙及雌孕激素治疗对大鼠卵巢Bcl-2和Bax表达的实验研究

论文摘要

雷公藤多甙（TWP）具有较强的抗炎及免疫抑制作用,是迄今为止免疫抑制作用最可靠的中药之一,已经被作为基本免疫抑制剂药物广泛应用于各种原发性和继发性肾炎包括慢性肾小球肾炎、肾病综合症、过敏性紫癜性肾炎、狼疮性肾炎等疾病,以及移植的抗排异治疗等。但其对女性生殖系统的毒副作用在很大程度上限制了育龄患者的用药,影响了治疗效果。近期研究显示,雌孕激素序贯疗法（HPT）能够改善TWP致育龄期女性卵巢功能减退或衰竭引起的围绝经期征候群,调节内分泌,使子宫有规律性的撤退性出血,维持了血清中雌激素（E2）,卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）的正常水平,临床总有效率达90.47%。故针对TW制剂导致的女性生殖系统损害,我们把HPT使用建立人工周期的方法应用实验研究中。通过检测雌性大鼠卵巢性激素,生殖器官重量、形态学改变,及卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达等几种指标来观察临床剂量TWP对雌性生殖系统的损害及HPT对TWP所致雌性生殖系统损害的保护作用。通过观察分析本实验的结果,希望对TWP造成的雌性生殖系统的损伤机制有进一步了解;也将对TWP所致月经紊乱、闭经及卵巢早衰的临床治疗及预防性治疗有很好的指导作用,从而找出更好的治疗方案指导临床用药。目的通过观察HPT法对TWP所致生殖系统损害大鼠的血性激素的变化及卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其治疗作用及其分子机制。方法取100只SD雌性大鼠随机分为正常对照组,雌孕激素干预组（干预组）,雌孕激素治疗组（治疗组）,自然恢复组（恢复组）和雷公藤组。共观察16周。正常对照组:每日等量溶媒灌胃16周;干预组:每日以TWP灌胃16周,同时用HPT;治疗组:每日以TWP灌胃,12周后改用HPT,4周后停用;恢复组:每日以TWP灌胃,12周后停用TWP,继续喂养4周;雷公藤组:每日以TWP灌胃16周。运用放免法测定血性激素水平的变化,HE染色观察卵巢组织变化,免疫组化染色法检测卵巢组织颗粒细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果（1）与对照组相比,雷公藤组和恢复组大鼠血LH和FSH水平明显升高,E2的分泌明显下降,且差异有统计学意义（P<0.05）;光镜下形态学观察可见卵巢萎缩,卵巢组织结构明显受损,各级卵泡明显减少,卵泡闭锁较多,黄体退化萎缩,干预组各指标则无明显改变。（2）在Bcl-2蛋白表达上,对照组明显高于其它各实验组,而雷公藤组明显低于其它组,且差异具有统计学意义（P<0.01）;治疗组与干预组比较无明显差异（P>0.05）。在Bax蛋白表达上,雷公藤组明显高于对照组,干预组和治疗组;而对照组明显低于治疗组,恢复组和雷公藤组（P<0.01）,而与干预组无明显差异。结论TWP可致雌性大鼠生殖系统的损害,HPT对TWP所致雌性大鼠卵巢损伤有较好的保护作用,机制可能与其上调抑制凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,下调促凋亡因子Bax蛋白的表达有关。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料
• 2.1 动物
• 2.2 药物
• 2.3 试剂
• 2.4 仪器与设备
• 2.5 溶液配制
• 3 实验方法
• 3.1 正常动情周期大鼠的选取
• 3.2 动物分组及处理
• 3.2.1 一期实验
• 3.2.1.1 用药方案
• 3.2.1.2 观察指标
• 3.2.2 二期实验
• 3.3 卵巢组织的病理形态学分析
• 3.3.1 HE （苏木素-伊红）染色
• 3.3.2 卵巢的病理形态学观察
• 3.4 血清E2、FSH、LH 的测定
• 3.4.1 原理
• 3.4.2 操作方法
• 3.4.3 结果计算
• 3.5 颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax 的表达测定
• 3.5.1 免疫组化操作步骤
• 3.5.2 镜下观察摄片及计算机软件图像分析
• 3.6 统计学处理
• 4 结果
• 4.1 各组大鼠的血清性激素水平的变化
• 4.2 各组大鼠HE染色结果
• 4.3 Bcl-2 和 Bax 表达的免疫组化检测结果
• 附图
• 5 讨论
• 5.1 TWP 的药理作用
• 5.2 TWP 的临床应用及作用机制
• 5.3 TWP 对雌性生殖系统影响及损害机制
• 5.4 HPT的临床应用及保护机制
• 5.5 颗粒细胞上bcl-2、bax的表达
• 6 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢
• 综述: 雷公藤多甙的研究进展