冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定

冰凌花转录因子AaDREB1基因的表达分析及功能鉴定

论文摘要

低温、干旱和高盐等不利环境条件严重制约着植物的生长和产量。DREB(dehydration responsive element binding,干旱应答元件结合蛋白质)能特异结合启动子中含有DRE/CRT (dehydration-responsive element/C-repeat element)顺式元件(G/ACCGAC),激活许多逆境诱导基因的表达,增强植物对逆境的耐受力。对调控逆境诱导基因的表达具有非常重要的作用,在提高植物综合抗逆性方面将有巨大的应用前景。本研究在获得具有自主知识产权的AαDREB1基因基础上(基因银行注册号码为HQ889135),进一步利用半定量RT-PCR的方法分析该基因的组织特异性表达模式及在不同逆境胁迫下的表达模式;应用酵母单杂交的方法研究了该基因的转录激活分析;将已构建好的AαDREB1基因植物表达载体通过农杆菌介导的转化方法分别转化拟南芥和水稻,并对不同胁迫处理下的转基因拟南芥和水稻进行了表型分析。主要研究结果如下:(1)半定量RT-PCR结果表明:在非胁迫情况下,该基因在根、茎、叶和花中有表达,而在低温,干旱,高盐,和ABA诱导下该基因的表达量有所提高,说明了AαDREB1:基因是组成型表达的,并且低温、干旱和高盐胁迫能够诱导AαDREB1基因的表达。(2)酵母单杂交结果显示:AαDREB1基因编码的一个转录激活子能够与DRE/CRT元件特异性结合,从而激活下游报告基因的表达。(3)转基因拟南芥表型分析结果表明:AαDREB1(?)基因在拟南芥中的超表达能够增强转基因拟南芥对高盐、干旱和低温胁迫的耐受性。(4)高盐胁迫处理后,分别对转基因和野生型水稻进行了存活率和叶绿素含量的分析。结果表明:AαDREB1基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率,降低了转基因水稻中叶绿素的分解,从而提高了其对高盐胁迫的耐受性。(5)与野生型水稻相比,干旱胁迫处理后,AαDREBl基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率和可溶性糖的含量,从而提高了其对干旱胁迫的耐受性。(6)低温胁迫处理后,与野生型水稻相比,AαDREB1基因在水稻中的超表达,提高了转基因水稻的存活率和脯氨酸的含量,从而提高了其对低温胁迫的耐受性。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 1.1 AP2/EREBP转录因子
  • 1.2 DREB转录因子
  • 1.2.1 DREB转录因子的发现
  • 1.2.2 CBF/DREB1转录因子的表达调控
  • 1.2.3 DREB转录因子在植物抗逆基因工程中的应用
  • 1.2.4 RDEB转录因子在植物杭逆基因工程中的应用
  • 1.3 植物抗渗透胁迫的分子机制
  • 1.4 实验目的和意义
  • 第二章 实验材料和方法
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 植物材料
  • 2.1.2 菌株和质粒
  • 2.1.3 酶和生化试剂
  • 2.1.4 PCR引物
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 利用半定量RT-PCR分析冰凌花AaDREB1基因的表达特性
  • 2.2.2 转录因子的体内结合特性和激活功能分析
  • 2.2.3 冰凌花AaDREB1基因遗传转化研究
  • 第三章 结果与分析
  • 3.1 冰凌花AaDREB1基因的组织特异性和胁迫诱导表达分析
  • 3.2 AaDREB1的转录激活分析
  • 3.2.1 酵母的转化
  • 3.2.2 AaDREB1的转录激活分析
  • 3.3 转基因拟南芥的表型分析
  • 3.4 转基因水稻的耐受性分析
  • 3.4.1 AaDREB1基因的超表达提高了转基因水稻对盐的耐受性
  • 3.4.2 AaDREB1基因的超表达提高了转基因水稻对干旱的耐受性
  • 3.4.3 AaDREB1基因的超表达提高了转基因水稻对低温的耐受性
  • 第四章 讨论
  • 4.1 冰凌花AaDREB1基因的组织特异性表达和胁迫表达分析
  • 4.2 AaDREB1的转录激活分析
  • 4.3 转基因拟南芥和水稻的表型分析
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 个人简介
  • 相关论文文献

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