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氧化脂蛋白（a）检测及临床应用研究

2020-12-04阅读(410)

氧化脂蛋白（a）检测及临床应用研究

论文摘要

高脂蛋白（a）[Lp（a）]作为动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）性心、脑血管疾病的独立危险因素己得到公认,氧化Lp（a）[ox-Lp（a）]可导致巨噬细胞转变为泡沫细胞,干扰纤溶系统正常功能的发挥,促进细胞因子的释放,加速As进程。目的:（1）人血清中ox-Lp（a）自身抗体提取和特性分析。（2）分别采用ox-Lp（a）自身抗体、氧化LDL（ox-LDL）多克隆抗体,酶标抗载脂蛋白（a）[apo（a）]为检测抗体的酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定ox-Lp（a）水平。（3）探讨ox-Lp（a）水平在动脉粥样硬化（As）性心脑血管疾病中的变化及其机制,准确评价其临床价值。（4）对Lp（a）进行不同程度氧化、修饰,检测Lp（a）氧化位点等特性的改变。方法:（1）采用溴化氰活化的sepharose 4B交联ox-Lp（a）制备免疫吸附层析柱,从正常人血清中提取抗ox-Lp（a）自身抗体。（2）分别建立以抗ox-Lp（a）的自身抗体、抗ox-LDL多克隆抗体为包被抗体,酶标抗载脂蛋白（a）[apo（a）]为检测抗体的ox-Lp（a）ELISA检测法。（3）采用ELISA法测定139例冠心病组患者ox-Lp（a）水平,分析其与冠心病之间的关系。（4）采用不同浓度的Cu2+和丙二醛（MDA）分别对Lp（a）进行氧化、修饰,观察不同时相硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）、共轭双烯（CD）和氧化位点等特性的改变。结果:（1）所分析的8份正常人血清中均存在抗ox-Lp（a）自身抗体,与ox-Lp（a）、ox-LDL均具有良好的反应性;再经亲和层析除出抗ox-LDL自身抗体后,2份标本同ox-Lp（a）仍具有较高的反应性。（2）建立的两种ELISA检测法均同ox-Lp（a）具极强的免疫反应性,而同天然、MDA修饰的Lp（a）具极低的免疫反应能力。同对照组相比,两种ELISA法间结果高度相关（r=0.78,P<0.0001）。（3）本组冠心病患者血浆Lp（a）水平显著升高[（279.6±162.7）mg/L对（206.3±126.4）mg/L,P<0.0001];ox-Lp（a）水平亦明显增加（P<O.0001）,采用自身抗体和抗ox-LDL抗体建立的ELISA法测定结果分别为:（24.3±33.4）μg/ml对（8.4±9.3）μg/ml和（13.0±13.8）μg/ml对（7.3±9.7）μg/ml。ox-Lp（a）水平与冠心病病变程度密切相关,双支血管病变组患者TC水平高于单支血管病变组（p<0.01）;多支血管病变组患者ox-Lp（a）水平明显高于双支血管病变组和单支血管病变组（p<0.01）。（4）氧化、修饰引起Lp（a）TBARS值、CD值及ox-Lp（a）水平发生改变,三者水平先逐渐增加达到峰值,随后进入降解阶段;天然Lp（a）水平与氧化时间相关（r=-0.437,p=0.002）;TC、TG的水平随Cu2+和MDA的浓度的增大而发生变化。结论:提取的人血清ox-Lp（a）自身抗体可识别apo（a）和apoB氧化位点,采用自身抗体建立的ox-Lp（a）检测法能更真实、准确地反应体内Lp（a）的氧化状态。基于此法所检测的ox-Lp（a）水平明显高于正常人,表明ox-Lp（a）与冠状动脉病变的发生发展之间可能存在一定的相关性。氧化、修饰的Lp（a）结构和生物特性发生改变,TBARS和CD随时间的变化而变化,氧化后也产生了新的氧化位点。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 绪论
  • 1.1 脂蛋白与As
  • 1.1.1 脂蛋白（a）的结构特点与生物化学特性
  • 1.1.2 Ox-Lp（a）在AS中的作用
  • 1.1.3 Ox-Lp（a）和自身抗体
  • 1.1.4 展望
  • 1.2 酶联免疫吸附实验
  • 1.2.1 ELISA的原理
  • 1.2.2 ELISA常用的四种方法
  • 1.2.3 ELISA的影响因素
  • 2 材料和试剂
  • 2.1 主要仪器设备
  • 2.2 化学试剂
  • 2.3 常用溶液配制
  • 3 人体内氧化脂蛋白（a）自身抗体提取及特性分析
  • 3.1 实验方法
  • 3.1.1 Lp（a）的提取
  • 3.1.2 蛋白定量
  • 3.1.3 脂蛋白氧化
  • 3.1.4 亲和层析柱的制备
  • 3.1.5 自身抗体的提取
  • 3.1.6 自身抗体的鉴定
  • 3.1.7 统计学处理
  • 3.2 实验结果
  • 3.2.1 Lp（a）的洗脱曲线
  • 3.2.2 Ox-Lp（a）自身抗体的提取
  • 3.2.3 Ox-Lp（a）自身抗体的鉴定
  • 3.3 讨论
  • 3.3.1 Lp（a）的提取
  • 3.3.2 亲和层析柱的制备
  • 3.3.3 抗体的洗脱
  • 3.3.4 抗体的亲和力
  • 3.3.5 自身抗体的鉴定
  • 4 氧化脂蛋白（a）ELISA检测法
  • 4.1 实验方法
  • 4.1.1 采用混合人血浆中提取的自身抗体建立ELISA法
  • 4.1.2 采用体外制备的特异性抗体建立ELISA法
  • 4.1.3 Ox-Lp（a）的ELISA检测
  • 4.1.4 统计学处理
  • 4.2 结果
  • 4.2.1 实验条件
  • 4.2.2 方法评价
  • 4.3 讨论
  • 5 冠心病患者氧化脂蛋白（a）检测
  • 5.1 实验方法
  • 5.1.1 标本来源
  • 5.1.2 血脂及载脂蛋白的测定
  • 5.1.3 ox-Lp（a）的ELISA测定
  • 5.1.4 冠状动脉造影
  • 5.1.5 统计学处理
  • 5.2 结果
  • 5.2.1 CHD患者血浆ox-Lp（a）水平
  • 5.2.2 各支病变组患者ox-Lp（a）及其他血脂和载脂蛋白水平
  • 5.3 讨论
  • 6 氧化、修饰对脂蛋白（a）氧化位点等特性的影响
  • 6.1 实验方法
  • 6.1.1 Lp（a）的提取
  • 6.1.2 MDA溶液的制备
  • 6.1.3 脂蛋白的氧化、修饰
  • 6.1.4 脂蛋白氧化、修饰程度分析
  • 6.1.5 统计学处理
  • 6.2 结果
  • 6.2.1 氧化、修饰对TBARS值的影响
  • 6.2.2 氧化、修饰对CD值的影响
  • 6.2.3 ELISA法检测氧化位点的改变
  • 6.2.4 脂蛋白及脂质含量的变化
  • 6.3 讨论
  • 全文小结
  • 致谢
  • 参考文献

    • 相关论文文献

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