论文摘要
人乙肝病毒（Hepatitis B virus, HBV）引起人肝脏急慢性炎症,最终导致肝纤维化（liver cirrhosis, LC）及肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）。目前对于HBV的致病和致癌机理还不是很清楚。为深入探讨HBV的致病机理,采用基因芯片系统筛选了肝癌细胞系HepG2和整合了HBV全基因组的HepG2.2.15细胞系中差异表达基因,检测结果发现载脂蛋白A1（ApoAl）和载脂蛋白B （ApoB）在HepG2.2.15中的表达明显低于HepG2细胞,而载脂蛋白M （ApoM）在HepG2.2.15细胞表达升高,进一步检测了HBV患者和健康对照者ApoA1、ApoB、ApoE和ApoM的血清学水平。结果表明,HBV感染过程中ApoA1和ApoB的血清学水平水平显著降低；而ApoM的血清学水平在HBV患者中显著升高。为探讨HBV调节ApoA1的机制,构建了ApoA1基因启动子荧光素酶的报告基因pApoA1-Luc,并采用RT-PCR和Western-blot检测了HBV对ApoA1mRNA和蛋白表达的影响,结果显示HBV能够在启动子、mRNA和蛋白水平抑制ApoAl的表达,并且呈剂量依赖效应。为探讨HBV调节ApoB的机制,将pHBV1.3转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western印迹法对ApoB mRNA和蛋白的表达水平进行了检测,表明HBV能够在HepG2细胞抑制ApoB mRNA和蛋白水平上的表达水平。微粒体甘油三酯转移蛋白（MTP）是ApoB的调节蛋白,进一步发现HBV能够抑制MTP的表达。因此,HBV可能通过抑制MTP的表达来抑制ApoB的表达和分泌。为探讨HBV对ApoM表达的影响,构建了ApoM启动子荧光素酶报告基因的载体pAPOM-luc,通过荧光报告基因系统检测了HBV对ApoM基因启动子的调节作用,并采用RT-PCR和Western-blot检测了HBV对ApoM mRNA和蛋白表达的变化,结果显示HBV能够在启动子、mRNA和蛋白水平促进ApoM的表达,并且ApoM能够抑制HBV的复制。总之,本研究探讨了HBV对ApoA1、ApoB和ApoM表达的影响,并初步探讨了其调节机制,为揭示HBV的致病机理奠定了一定的理论基础。