南方红豆杉水提物抑制人肺癌A549细胞及联合厄洛替尼对其EGFR表达影响的研究

论文摘要

目的本文旨在通过检测PCNA、血管生成、信号通路等相关蛋白表达来分析南方红豆杉水提物抑制人肺癌A549细胞机制,同时通过检测EGFR表达分析其联合厄洛替尼对人肺癌A549细胞的影响,为南方红豆杉水提物抗肺癌的临床治疗提供实验依据。方法①通过ELISA方法、Western-blot方法检测南方红豆杉水提物作用A549细胞24h后对PCNA、VEGF、MAPK信号通路等蛋白水平的影响。以2.0mg/ml、2.5mg/ml、3.0mg/ml三个不同浓度南方红豆杉水提物作用于人肺癌A549细胞24h后,检测PCNA、VEGF、ERK、P-ERK、P38、P-P38蛋白的表达情况,并与空白对照组比较。②通过MTT法筛选厄洛替尼抑制A549细胞的最佳浓度。③通过MTT法检测南方红豆杉水提物联合厄洛替尼对人肺癌A549细胞增殖的影响并通过ELISA方法、Western-blot方法检测对EGFR,磷酸化EGFR蛋白表达的影响。南方红豆杉水提物组（Ⅰ组）按浓度分为Ia组（2.0mg/ml）、Ib组（2.5mg/ml）、Ic组（3.0mg/ml）；厄洛替尼组（Ⅱ组）浓度为20uM；厄洛替尼与南方红豆杉水提物联合组（Ⅲ组）,其中,厄洛替尼浓度为20uM,南方红豆杉水提物浓度为2.5mg/ml；Ⅰ-Ⅲ组分别干预A549细胞24h后与空白对照组（Ⅳ组）结果进行比较。结果①南方红豆杉水提物能够下调人肺癌A549细胞PCNA蛋白表达；南方红豆杉水提物能够上调P-P38蛋白表达,下调P-ERK蛋白表达,影响A549细胞MAPK信号通路；VEGF蛋白无影响。②厄洛替尼浓度为20uM时其对人肺癌A549细胞抑制率最高,达27.87%；联合组抑制率分别为54.33%、61.96%、71.84%与厄洛替尼组（27.8%）和空白对照组比较,均具有显著差异,P<0.01；③南方红豆杉水提物能够下调人肺癌A549细胞P-EGFR蛋白表达,联合厄洛替尼后P-EGFR蛋白表达下降明显。结论①南方红豆杉水提物抑制人肺癌A549细胞增殖的作用可能与下调PCNA,上调P-P38蛋白表达,下调P-ERK蛋白,阻断ERK1/2信号通路可能是该中药抗肿瘤作用机理之一。②厄洛替尼具有抑制人肺癌A549细胞增殖的作用,并呈一定的量效关系；③南方红豆杉水提物联合厄洛替尼能够增强抑制人肺癌A549细胞增殖的作用,其机制可能与下调了P-EGFR蛋白有关。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 实验研究
• 一、材料与方法
• （一） 实验材料
• 1. 实验室
• 2. 实验细胞株
• 3. 实验仪器
• 4. 实验药品
• 5. 实验试剂
• 6. 主要试剂的配置
• （二） 实验方法
• 1. 南方红豆杉水提物的制备
• 2. 南方红豆杉水提物的制备人肺腺癌A549细胞的复苏、冻存、计数、培养与传代
• 3. 细胞形态学观察
• 4. MTT法检测南方红豆杉水提物联合特罗凯对人肺癌A549细胞增殖的影响
• 5. Elisa测定细胞培养上清VEGF、EGFR蛋白含量的变化
• 6. Western blot检测南方红豆杉水提物干预人肺癌A549细胞后相关蛋白表达的影响
• （三） 统计学处理
• 二、结果
• （一） 南方红豆杉水提物的得率
• （二） 南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞形态的影响
• （三） 厄洛替尼对人肺癌A549细胞增殖的影响
• （四） 南方红豆杉水提物联合特罗凯对人肺癌A549细胞增殖的影响
• （五） Eliasa测定南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞相关因子的影响
• （六） 南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞VEGF等蛋白表达的影响
• 三、分析与讨论
• （一） 抗肿瘤药物热点研究
• （二） 中药抗肿瘤的研究现状
• （三） 厄洛替尼对A549细胞增殖影响的分析
• （四） 南方红豆杉水提物联合厄洛替尼对人肺癌A549细胞增殖的影响
• （五） 南方红豆杉抗人肺腺癌A549细胞增殖机制研究的分析
• （六） 南方红豆杉抗人肺腺癌A549细胞血管生成及转移机制研究的分析
• （七） 南方红豆杉水提物抗人肺腺癌A549细胞表皮生长因子受体机制的分析
• （八） 南方红豆杉抗人肺腺癌A549细胞对细胞信号转导影响研究的分析
• （九） 工作展望
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 文献综述
• 参考文献