黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠治疗作用及机制的比较研究

论文摘要

目的观察比较黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗（IR）和胰岛β细胞功能的影响,探讨黄连、生地及其配伍治疗2型糖尿病的作用机制,并比较黄连配伍生地在作用靶点上是否具有选择性或协同性,揭示黄连丸方剂配伍的科学内涵。方法采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射的方法诱导SD大鼠,建立2型糖尿病动物模型,将模型动物随机分为黄连组、生地组、黄连+生地组、罗格列酮组及模型组,分别给予相应药物进行干预,另设正常对照组。干预4周后各组大鼠行口服糖耐量试验（OGTT）和胰岛素释放试验（IRT）,收集各组空腹、30min、60min、120min、180min血清标本,用放免法检测血清胰岛素含量,用葡萄糖氧化酶法检测血清葡萄糖浓度,并绘制各组OGTT曲线图,计算各组胰岛素曲线下面积（INSAUC ）和胰岛素敏感指数（ISI）。行IRT后,将各组大鼠处死,收集血清和胰腺组织标本,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）水平,用酶法检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,用铜离子还原法检测游离脂肪酸（FFA）浓度,用免疫组化法检测胰腺组织胰岛素分泌表达,计算平均光密度值（MOD）,用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测胰岛细胞凋亡情况,计算凋亡率,用透射电镜观察胰岛β细胞分泌情况。结果一.黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠OGTT、INSAUC和ISI的影响与正常组比较,模型组各时间点血糖均显著升高,INSAUC显著减小,ISI显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组各时间点血糖均显著降低,INSAUC显著增加,ISI显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与黄连+生地复方组比较,黄连、生地各单药组各时间点血糖水平均显著高于复方组,INSAUC显著小于复方组,ISI显著低于复方组,差异有统计学意义（P<0.01）。二.黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠血清TG、TC、LDL-C及HDL-C的影响与正常组比较,模型组血清TG、TC、LDL-C显著升高,HDL-C显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组血清TG、TC、LDL-C显著降低,HDL-C显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与黄连+生地复方组比较,黄连、生地各单药组血清TG、TC、LDL-C显著高于复方组,HDL-C显著低于复方组,差异有统计学意义（P<0.01）。三.黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA的影响与正常组比较,模型组血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA均显著降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与黄连+生地复方组比较,黄连、生地各单药组血清IL-6、IL-1β、TNF-α及FFA均显著高于复方组,差异有统计学意义（P<0.01）。四.黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠胰岛素表达分泌和胰岛细胞凋亡的影响阳性反应产物为棕黄色。正常组阳性反应产物,排列紧密,数量多,染色深;模型组阳性反应产物,显著减少,染色浅;各治疗组阳性反应产物排列稀疏,数量显著增多,染色深。与正常组比较,模型组的MOD显著减小,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组的MOD显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与黄连+生地复方组比较,黄连、生地各单药组MOD显著低于复方组,差异有统计学意义（P<0.05）。正常细胞细胞核标记为蓝色,凋亡细胞细胞核标记为深红棕色。与正常组比较,模型组细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与黄连+生地复方组比较,黄连、生地各单药组细胞凋亡率显著高于复方组,差异有统计学意义（P<0.05）。电镜下正常组胰岛β细胞细胞核呈规则的卵圆形,细胞浆内内质网、线粒体散在分布,结构清晰,胞浆内有大量分泌颗粒,颗粒密集,颗粒呈圆形,外有界膜包绕,颗粒内有电子密度不一的芯,芯为圆形或不规则形,界膜与芯之间有大小不一的空隙,明亮,清晰。模型组胰岛β细胞细胞核缩小,不规则,核仁消失,染色质聚集,线粒体无明显肿胀,胞浆内脂滴堆积,分泌颗粒显著减少,颗粒与芯之间的空隙增加,透亮度增加,有的界膜破裂,互相融合;黄连组胰岛β细胞细胞核形态不规则,核仁消失,染色质向一侧聚集,胞浆内分泌颗粒数量增多,较少界膜破裂,互相融合;生地组胰岛β细胞细胞核规则,核仁清晰,胞浆内少量脂滴沉积,颗粒分布稀疏,分泌颗粒数量没有明显增多;黄连+生地组胰岛β细胞细胞核规则,核仁清晰,粗面内质网发达,胞浆内没有脂滴沉积,颗粒分布密集,分泌颗粒数量明显增多,颗粒增大,较少界膜破裂,互相融合;罗格列酮组胰岛β细胞细胞核呈圆形,胞浆内颗粒分布密集,颗粒较小,芯为圆形,界膜与芯之间空隙较小,没有界膜破裂,互相融合。结论1黄连、生地及其配伍对2型糖尿病大鼠都有一定的治疗作用,以黄连生地配伍组治疗效果最佳。2黄连、生地及其配伍治疗2型糖尿病有效的机制在于降低炎性细胞因子改善胰岛素抵抗和抑制细胞凋亡保护β细胞。3黄连配伍生地在降低炎性细胞因子和抑制细胞凋亡这两个环节上优于单药,提示黄连配伍生地在这两个作用环节上具有协同性,揭示了黄连丸方剂配伍的科学内涵。

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