论文摘要
百合是卫生部审批通过的首批药食两用品,国内外学者对百合多糖进行了初步研究,发现它们具有降血糖、抗氧化等生物活性。但大多数活性研究是以百合多糖的粗提物为物质基础进行的。目前对于百合多糖结构与构象的研究不多,同时由于研究者在材料选择和方法的选用上存在差异,对百合多糖研究所得的结果也不尽相同。本文在国内外最新研究成果的基础上,综合应用分析化学及现代仪器分析等一系列现代研究方法和技术手段,系统地研究了从龙牙百合中提取纯化出来的百合多糖LLP1、LLP2的组成、结构及其构象,并对其部分活性进行了初步研究。现将本文主要研究结果归纳如下。1.确定了测定和计算百合多糖含量的方法。采用蒽酮-硫酸比色法结合换算因子来测定和计算百合中多糖含量,其数据可靠,该方法重现性较好,较能反应多糖的真实含量,适合于百合中多糖含量的测定。用该法测得百合多糖的换算因子f=2.718,新鲜龙牙百合鳞茎中多糖平均含量为28.18%。2.采用现代分离分析手段建立了百合多糖的优选纯化工艺、纯度鉴定和分子量测定方法。采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析（4.6cm×80cm）对百合水提物进行纯化,得到两个组分LLP1、LLP2（Longya Lily Polysaccharide）。经高效液相凝胶渗透色谱检测发现LLP1为单一对称色谱峰,紫外280nm处无吸收峰,纯度大于98%,表明该组分为均一多糖组分,重均分子量Mw1为11756Dal.;LLP2为单一对称色谱峰,紫外280nm和示差检测的出峰时间相差很小,纯度98%,表明该组分可能是糖-蛋白复合物,重均分子量Mw2为1038773 Dal.。研究表明DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析（4.6cm×80cm）纯化速度快,方法简便,效率高,且能方便放大生产。3.对LLP1、LLP2的理化性质进行了研究,发现LLP1为白色絮状固体,极易吸潮,溶于水和二甲亚砜,尤易溶于热水,不溶于高浓度乙醇、丙酮等有机溶剂,水溶液呈透明粘稠状,Molish反应、蒽酮-硫酸反应和硫酸-咔唑反应显示有糖及糖醛酸存在,考马斯亮蓝反应显示不含蛋白质。LLP2为淡黄色絮状固体,易吸潮,不易溶于冷水,易溶于热水和二甲亚砜,不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂,水溶液呈半透明状,粘性极强,Molish反应、蒽酮-硫酸反应、硫酸-咔唑反应显示有糖及糖醛酸存在;考马斯亮蓝反应显示有蛋白质存在。同时研究了两种多糖在溶液中的构象,I2-KI反应发现两种多糖可能存在较长的侧链和较多的分枝;刚果红反应结果表明LLP1、LLP2不具有三股螺旋结构。4.采用现代化学及仪器分析方法（硫酸-咔唑法、GC法、高碘酸氧化、Smith降解、红外光谱和NMR法等）,首次解析了LLP1、LLP2的一级结构。LLP1单糖组成的摩尔比为Glc:Man:Ara=18.60:25.14:1.00;糖醛酸和中性糖含量分别为4.02%、94.08%;LLP1不含甲基糖,主链由甘露糖和葡萄糖组成,葡萄糖残基的连接方式有1,4-linked Glcp和1,6-linked Glcp,糖链中有末端葡萄糖残基,甘露糖以1,3-linked Manp方式连接。侧链则由阿拉伯糖和糖醛酸组成。它们都以α形式连接。LLP2的单糖组成摩尔比为Gal:Rha:Ara=3.58:1.00:1.09,糖醛酸和中性糖含量分别为77.13%、19.46%,蛋白质1.60%;高碘酸氧化与Smith降解结果显示LLP2中没有1→6糖苷键,含有1→4糖苷键;LLP2不含甲基糖,主链由糖醛酸以1→4方式连接组成,在糖醛酸的3-位有可能形成侧链。侧链由半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成,半乳糖残基以1→4方式连接。它们都以α形式连接。5.通过四种不同体系（对α-淀粉酶的抑制作用、DPPH·自由基、超氧阴离子和羟基自由基）研究了百合多糖LLP1、LLP2的生物活性。结果显示,LLP1、LLP2浓度增加,对α-淀粉酶的抑制率会提高,且在相同浓度条件下,LLP2比LLP1的抑制作用要显著;LLP1对DPPH·无清除作用,对超氧阴离子自由基几乎无清除能力,而对·OH自由基有较强的清除作用;LLP2对超氧阴离子的清除能力比较弱,对DPPH·和·OH自由基均有较强的清除能力。试验结果显示,在一定浓度范围内,LLP2的生物活性比LLP1的活性高,这与多糖的糖醛酸含量、是否是糖-蛋白质复合物及构效关系有关。