微生物抗菌肽的制备及其抑菌性质研究

论文摘要

抗菌肽是一种具有抗菌作用的多肽,能够抑制或杀死多种致病菌,有代替抗生素的潜能。本论文研究了侧孢短芽孢杆菌S62-9发酵所产抗菌肽的提取制备及其抑菌性质。在抗菌肽的提取制备过程中,首先要对发酵液进行除菌,试验结果表明用121℃高压蒸汽灭菌可以快速彻底的去除发酵液中的菌体。本论文中建立了1种新型的抗菌肽分离纯化方法:活性炭吸附法,结果抑菌活性回收率达到90%以上,纯化倍数达到15倍。分离纯化后液体经旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥制得固态产品。本论文对抗菌肽的抑菌性质进行了研究。该抗菌肽抑菌谱比较广,对金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、藤黄微球菌、乳酸乳球菌、沙门氏菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌等典型的G+细菌和G-细菌均有不同程度的抑制作用。该抗菌肽具有很强的热稳定性,121℃处理15 min活性损失30%左右,100℃处理30 min活性损失20%左右。该抗菌肽具有宽广的pH稳定性,将抗菌肽在pH 2-11的条件下30℃处理2 h,抑菌能力稳定,pH 6抑菌活性损失最大,20%左右。该抗菌肽对α-淀粉酶和胃蛋白酶稍敏感,对蛋白酶E、胰蛋白酶、溶菌酶、酯酶不敏感。该抗菌肽对十二烷基磺酸钠（SDS）和三氯乙酸（TCA）敏感,对甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、吐温-20、吐温-80、冰醋酸、巯基乙醇和乙二胺四乙酸（EDTA）均不敏感。将抗菌肽制备成饲料添加剂,该饲料添加剂具有抑菌活性,且真空包装后4℃储藏稳定性良好,6周之内活性基本不损失,为在饲料中应用奠定基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 抗菌肽的定义及种类
• 1.1.1 抗菌肽的定义
• 1.1.2 抗菌肽种类
• 1.1.3 微生物抗菌肽
• 1.2 抗菌肽的性质
• 1.2.1 抗菌肽的抑菌谱
• 1.2.2 细菌素的理化特性
• 1.2.3 抗菌肽的作用方式
• 1.3 抗菌肽的应用
• 1.3.1 抗菌肽在食品中的应用
• 1.3.2 抗菌肽在饲料中的应用
• 1.4 抗菌肽的分离纯化方法
• 1.4.1 盐析法
• 1.4.2 有机溶剂沉淀法
• 1.4.3 菌体吸附法
• 1.4.4 吸附剂吸附法
• 1.5 课题研究内容
• 第2章 抗菌肽的分离纯化
• 2.1 试验材料与主要仪器、试剂
• 2.1.1 试验菌种
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 试验与方法
• 2.2.1 发酵液制备
• 2.2.2 分析方法
• 2.2.3 发酵液除菌
• 2.2.4 活性炭吸附法分离纯化抗菌肽
• 2.2.5 浓缩干燥
• 2.3 试验结果与分析
• 2.3.1 分析方法
• 2.3.2 发酵液除菌
• 2.3.3 活性炭吸附法分离纯化抗菌肽
• 2.4 本章小结
• 第3章 抗菌肽的抑菌性质研究
• 3.1 试验材料与试剂
• 3.1.1 指示菌培养基
• 3.1.2 试验试剂
• 3.1.3 试验仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 抑菌谱的测定
• 3.2.2 热稳定性
• 3.2.3 pH 稳定性
• 3.2.4 酶敏感性
• 3.2.5 化学试剂稳定性
• 3.2.6 抑菌作用模式研究
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 抑菌谱
• 3.3.2 热稳定性
• 3.3.3 pH 稳定性
• 3.3.4 酶敏感性
• 3.3.5 化学试剂稳定性
• 3.3.6 抑菌作用模式研究
• 3.4 本章小结
• 第4章 抗菌肽饲料添加剂制备研究
• 4.1 试验材料与试剂
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 指示菌
• 4.1.3 培养基
• 4.1.4 试验仪器
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 麸皮前处理
• 4.2.2 抗菌肽饲料添加剂制备
• 4.2.3 抗菌肽饲料添加剂性质研究
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 麸皮添加量对吸附影响
• 4.3.2 pH 对吸附影响
• 4.3.3 时间对吸附影响
• 4.3.4 温度对吸附影响
• 4.3.5 抗菌肽饲料添加剂的抑菌活性
• 4.3.6 抗菌肽饲料添加剂稳定性
• 4.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表论文
• 致谢