王烨李基明黄革玲(福建省厦门市妇幼保健院福建厦门361005)
【中图分类号】R752【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)45-0178-02
【摘要】目的探讨黄疸患儿与其母亲人巨细胞病毒感染之间的关系。方法将326名黄疸婴儿分为新生儿组和1~6月龄组,应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测婴儿尿液及其母亲乳汁中的人巨细胞病毒DNA(HCMV-DNA)。结果新生儿组母乳HCMV-DNA阳性率达61.84%,尿液阳性率达24.34%;1~6月龄组母乳HCMV-DNA阳性率达64.94%,尿液阳性率达41.38%。结论乳汁是婴儿HCMV感染的高风险因素,1~6月龄组婴儿HCMV感染与母亲乳汁的关系较新生儿组大。
【关键词】人巨细胞病毒FQ-PCR黄疸母婴
人巨细胞病毒(humancytomegalovirus,HCMV)属于疱疹病毒β亚科,是一种发病率较高的病毒,成人感染率为60%~100%,绝大多数为隐性感染,只有婴幼儿感染者易发病。婴儿黄疸可分为生理性黄疸和病理性黄疸,其中人巨细胞病毒是婴儿病理性黄疸的重要病因之一。本研究采用实时荧光定量PCR技术对326例黄疸患儿的尿液及患儿母亲乳汁中的HCMV-DNA进行检测,研究母婴间人巨细胞病毒感染的关系。
1资料与方法
1.1一般资料病例选择:对2011年2月~2012年6月因黄疸症状在厦门市妇幼保健院儿科及新生儿科就诊的婴儿326例,其中新生儿组152例(男80例,女72例),1~6月龄组174例(男88例,女86例),分别用无菌试管采集晨尿3~5mL。同时用无菌试管采集患儿母亲(20~48岁)乳汁3~5mL。
1.2仪器采用实时荧光定量PCR,检测仪器为罗氏LightcyclerPCR扩增仪,试剂采用中山大学达安基因股份有限公司生产的HCMV核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒。
1.3方法DNA模板的提取:尿液样本与乳汁样本的操作步骤相同。取1mL至1.5mL离心管,10000rpm离心5min;弃上清,沉淀物加入50μLDNA提取液充分混匀,另取阴阳性对照质控品各50μL加入等量DNA提取液混匀,100℃恒温处理10min,10000rpm离心5min后,各取上清液2μL分别加入专用毛细管中,盖上包埋有HCMV-DNA反应体系的反应盖,4000rpm离心10s,插入圆形卡盘倒置10s后放入仪器。
FQ-PCR:设置循环条件:93℃2min预变性,93℃5s,57℃45s,40个循环,荧光采集点在57℃45s末,由电脑软件自动计算和读取结果。
1.4统计学处理婴儿采用尿HCMV-DNA测定阳性的例数,母亲采用乳汁HCMV-DNA测定阳性的例数,HCMV-DNA拷贝>500copies/mL判定为阳性。统计学处理采用χ2检验。
2结果
2.1新生儿组HCMV感染状况在94例乳汁HCMV阳性的病例中,婴儿尿液有68例HCMV阴性,26例阳性,感染率为27.66%;在58例乳汁HCMV阳性的病例中,婴儿尿液有47例HCMV阴性,11例阳性,感染率为18.97%。两组进行χ2检验,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1新生儿组患儿尿与配对的母乳HCMV感染情况
类别尿液阴性尿液阳性合计(感染率)
乳汁阳性682694(27.66%)
乳汁阴性471158(18.97%)
合计11537152(24.34%)
2.21~6月龄组HCMV感染状况在113例乳汁HCMV阳性的病例中,婴儿尿液有56例HCMV阴性,57例阳性,感染率为50.44%;在61例乳汁HCMV阳性的病例中,婴儿尿液有46例HCMV阴性,15例阳性,感染率为24.59%。两组进行χ2检验,差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。
表21~6月龄组患儿尿与配对的母乳HCMV感染情况
类别尿液阴性尿液阳性合计
乳汁阳性5657113(50.44%)
乳汁阴性461561(24.59%)
合计10272174(41.38%)
2.3婴儿与母亲乳汁检测结果两组数据相符情况显示,新生儿组为1-(68+11)/152=0.480,1~6月龄组为1-(56+15)/174=0.592,说明1~6月龄组患儿HCMV感染与母乳的关系较新生儿组的大。
3讨论
目前临床常用血清学和FQ-PCR辅助HCMV感染的诊断。但HCMV抗体一般在初次感染数周后才能检出,在免疫抑制状态下,HCMV抗体常延迟或缺乏,影响阳性检出率。所以本实验采用了具有高灵敏性、高特异性和精确定量的FQ-PCR,可依据HCMV-DNA水平的变化进行临床治疗,对患者的治疗效果进行评估[1]。HCMV最易侵犯管道上皮细胞,尤其是肾脏及肝胆系统。HCMV在肾小球和肾小管上皮细胞内复制,经尿液排出,尿中HCMV量可很好反映机体内HCMV病毒量,且阳性检出率较血高[2]。尿HCMV-DNA的检测已被证实可以帮助判断婴幼儿HCMV感染,并且尿较血更易收集,可以减轻婴儿的痛苦[3],故我们首选尿液作为婴儿HCMV-DNA检测的标本。
HCMV是引起新生儿黄疸的重要病因,因此检测黄疸患儿的HCMV,对于明确临床诊断和治疗都具有重要意义。本研究新生儿组母乳中HCMV-DNA阳性率高达61.84%,但新生儿尿液HCMV-DNA阳性率只有24.34%,说明虽然母乳HCMV阳性率较高,但新生儿感染HCMV还是较低,表明HCMV潜伏感染的母亲将体内病毒通过垂直传播传给胎儿的风险较低。原因可能是母亲的胎传抗体及初乳中免疫活性物质丰富,含有HCMVIgG等保护性抗体,可以中和HCMV,对婴儿预防感染及建立初级免疫系统十分重要,我们认为初乳在防止HCMV感染时起到了一定的作用,使新生儿HCMV感染率较低。
1~6月龄组母乳中HCMV-DNA阳性率达64.94%,婴儿尿液HCMV-DNA阳性率为41.38%,比较新生儿组结果有显著性差异。因此我们认为乳汁传播是出生一个月后婴儿感染HCMV的重要因素,原因也可能是婴儿母亲乳汁HCMVIgG等保护性抗体含量逐渐减少,婴儿免疫能力下降所致。BryantP等认为母乳喂养是婴儿感染HCMV的最重要途径,乳腺内病毒活化增殖的高峰在产后2~13周,排毒的母乳喂养超过1个月,婴儿容易被感染[4]。本研究显示母乳是婴儿HCMV感染的高风险因素,且1~6月龄组患儿HCMV感染与母乳的关系较新生儿组的大,因此对检测阳性者进行动态HCMV监测和随访是必要的,以获得他们的远期临床表现和预后资料,对于预防和治疗黄疸婴儿HCMV感染具有十分重要的意义。
参考文献
[1]周君霞,何林.荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测中的应用[J].中国热带医学,2007,7(5):717-718.
[2]ZhangS,ZhouS,LiL,etal.Monitoringhumancytomegalo-virusinfectionwithnestedPCR:comparisonofpositiveratesinplasmaandleukocytesandwithquantitativePCR[J].VirolJ,2010,7:73.
[3]郭爱华,路明.婴儿巨细胞病毒肺炎200例的分析[J].徐州医学院学报,2005,25(4):337-338.
[4]BryantP,MorleyC,GarlandS,etal.Cytomegalovirustransmissionfrombreastmilkinprematurebabies:doesitmatter[J].ArchDisChildFetalNeonatalEd,2002,87:F75-57.