论文摘要
目的应用RNA干扰方法特异性地降低胚胎干细胞中Nanog的表达。方法设计并合成四条针对Nanog序列的干扰片断,利用Cy3标记siRNA,利用流式方法检测siRNA的转染效率。siRNA转染J1细胞后,利用RT-PCR、Real-Time PCR、Western-Blot方法检测各个片断对J1细胞中Nanog表达的影响。结果RT-PCR结果显示在这四个片断中Nanog-P1、Nanog-P4能够比较明显地降低J1细胞中Nanog的表达。Real-Time PCR检测Nanog-P1对J1细胞中Nanog的干扰效率可达90%。Western-Blot结果显示J1细胞转染Nanog-P1后Nanog蛋白表达量也明显下降。结论Nanog-P1可有效降低J1细胞中Nanog的表达,干扰效率达90%左右。利用该片断特异性地降低J1细胞中Nanog的表达可以用于研究Nanog在胚胎干细胞中的作用机制。
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