钩藤与天麻配伍前后异钩藤碱在SHR大鼠心脏和脑部的分布与归经研究

论文摘要

本文选用天麻—钩藤药对,通过测定效应成分异钩藤碱在心脏、脑部的分布,再结合其在肝脏和肾脏的分布来探讨钩藤归经。这一药对源自中药复方天麻钩藤饮,中药钩藤、天麻是我国传统中药,钩藤归肝、心包经；天麻归肝经。本文确定了组织样品的预处理方法和色谱条件,具体如下：色谱条件：色谱柱：WatersTM（4.6×250mm, RP18.5μm）;流动相：甲醇-水（70：30）pH 8.0；流速为0.8 mL·min-1,检测波长：254 nm；柱温：30℃；进样量：20μL。预处理方法：将SHR大鼠股动脉放血,断头,取组织,用生理盐水（0.9%氯化钠溶液）将血洗净,分三次加入1.0 mL生理盐水,用组织匀浆器匀浆,制成匀浆液每1mL含组织0.3 g,匀浆后置于离心试管中漩涡混匀,低速离心（3500r·min-1）10min,取上清液,加入3.0 mL沉淀剂进行去蛋白处理,涡旋混匀,置于冰箱沉淀1 h,3500r·min-1低速离心10 rmin,取上清液60℃水浴N2流下吹干,加入250μL复溶剂复溶,涡旋混匀,10000 r·min-1下高速离心10 rmin,取上清液20μL进样。通过灌胃给予SHR大鼠钩藤水煎液和钩藤天麻配伍后水煎液,在30、60、120、150、180、240 min采集心、肝、肾、脑,经过预处理,检测各组织的异钩藤碱浓度,采用3P97药代动力学软件计算药代动力学参数。结果发现：配伍后异钩藤碱在心脏的达峰时间由配伍前的38 min推迟到86 min,配伍前后其吸收半衰期由6.4 min延迟到39.8 min,消除半衰期由377.6 min提前到96.2 min,由此可见配伍后异钩藤碱的吸收减慢,消除加快,并且由AUC0-240min可以看出配伍后生物利用度略有升高,同时发现配伍后其在心脏的分布增加。在脑部,比较配伍前后异钩藤碱的药代动力学参数发现：Cmax没有明显变化,达峰时间由39.0min提前至24.3min,其吸收半衰期和消除半衰期均提前,配伍后其消除速率常数增大,吸收速率常数没有明显变化,清除率增大,由此可见配伍后其在脑部的吸收略有加快,消除加快,生物利用度略有升高。肝脏在配伍后最大药物浓度和AUC0-240min明显降低,达峰时间也由原来的94 min缩短至10 min,清除率增加,配伍后表观分布容积增大,分布更加广泛；而在肾脏中,最大药物浓度和达峰时间没有明显变化,AUC增加。结论：钩藤归肝、心包经,配伍后心脏和脑中的药物含量增加,从现代医学来解释：钩藤的主要降压作用机制可能直接和反射性地抑制了血管运动中枢,以及阻滞交感神经和神经节,使外周血管扩张,阻力降低所致。而天麻同为降压药,两者配伍使用具有协同作用；从中医药角度来讲与其归心包经有密切联系,心包经主治心、胸、胃、神志病以及经脉循行部位的其他病症,即与心脏和脑有较密切的联系,本实验结果配伍后心脏和脑部的含量增加,与钩藤归心包经相符合。配伍后肝脏中异钩藤碱的含量明显降低可能是由于钩藤有肝毒性,配伍天麻可引钩藤不入肝,减轻毒性；配伍前后肾脏中异钩藤碱的含量较高,可能是因为肾脏是主要的排泄器官,其主要通过肾脏排出体外。配伍前后肝脏和肾脏的分布变化与钩藤归肝经有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 课题来源及研究内容和意义
• 1.1.1 课题来源
• 1.1.2 本课题研究的意义
• 1.1.3 本课题研究的内容
• 1.2 钩藤研究概况
• 1.2.1 钩藤化学成分研究
• 1.2.2 钩藤的药理作用研究
• 1.2.3 钩藤的临床应用
• 1.2.4 钩藤主要有效成分的药物动力学研究
• 1.3 中医归经理论研究综述
• 1.3.1 中药归经理论的形成和发展
• 1.3.2 归经理论研究现状
• 1.4 中药药对的研究
• 1.4.1 药对的形成过程
• 1.4.2 中药药对的组成
• 1.4.3 天麻、钩藤药对研究现状
• 1.5 生物样品的前处理概述
• 1.5.1 生物样品的采集
• 1.5.2 前处理过程
• 1.5.3 生物样品的保存
• 1.5.4 生物样品中被测组分萃取分离与浓集
• 1.6 肝阳上亢高血压动物造模现状
• 1.6.1 模型的建立
• 1.6.2 模型的评价
• 1.6.3 本实验模型动物的选择
• 第2章 组织样品预处理方法
• 2.1 仪器、试剂与材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 材料
• 2.2 动物饲养
• 2.3 药液的煎煮
• 2.4 色谱条件的确立
• 2.4.1 色谱条件
• 2.4.2 储备液的配制
• 2.5 组织样品的预处理方法的考察
• 2.5.1 组织样品的采集
• 2.5.2 沉淀剂的筛选
• 2.5.3 复溶溶剂的筛选
• 2.6 小结
• 2.7 讨论
• 2.7.1 钩藤药材的煎煮
• 2.7.2 色谱条件的筛选
• 2.7.3 沉淀剂的筛选
• 第3章 配伍前后异钩藤碱在心脏和脑部的组织分布
• 3.1 材料
• 3.1.1 药材
• 3.1.2 实验动物
• 3.2 动物饲养及给药
• 3.2.1 动物饲养
• 3.2.2 动物分组
• 3.2.3 给药量
• 3.3 组织样品的采集
• 3.4 组织样品的预处理
• 3.5 标准曲线的绘制
• 3.5.1 最低检测限（LOD）
• 3.5.2 色谱条件
• 3.5.3 对照品溶液的配制
• 3.6 方法学评价
• 3.6.1 精密度考察
• 3.6.2 重现性考察
• 3.6.3 稳定性考察
• 3.7 组织样品的含量测定
• 3.8 小结与讨论
• 第4章 实验结果
• 4.1 标准曲线
• 4.1.1 心脏标准曲线
• 4.1.2 脑标准曲线
• 4.1.3 精密度
• 4.1.4 稳定性
• 4.1.5 重现性
• 4.2 配伍前后异钩藤碱在组织的分布
• 4.2.1 配伍前后心脏中异钩藤碱的含量
• 4.2.2 配伍前后脑部异钩藤碱的含量
• 4.2.3 药物代谢动力学参数的计算
• 4.3 药物浓度-时间曲线
• 4.4 小结与讨论
• 第5章 效应成分在心、肝、肾、脑部分布的相关性分析
• 5.1 肝脏、肾组织中各时间点药物的浓度及药代动力学参数
• 5.1.1 各时间点肝、肾组织的异钩藤碱浓度
• 5.1.2 肝、肾组织的药物代谢动力学参数
• 5.1.3 肝、肾组织时间-药物浓度曲线
• 5.2 不同时间点各组织中异钩藤碱的浓度
• 5.3 小结与讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 附录