MTI2和Bt转基因拟南芥的鉴定及筛选

论文摘要

在抗虫转基因育种过程中,转基因植株的鉴定、筛选及生物测定是非常重要的环节。本研究从获得的转芥菜胰蛋白酶抑制剂基因(MTI2)拟南芥第一代种子T1开始进行抗性植株的筛选纯化,直到T5代抗性稳定不再分离时结束,结合PCR检测,对通过抗性筛选的转基因植株进行鉴定,获得抗性纯合的转基因植株。随后对转MTI2基因材料和转Bt基因(改良SN19基因)材料进行生物测定,比较和鉴定两种抗虫基因对鳞翅目害虫小菜蛾的抗性水平。筛选出具有较好抗虫性的转Bt基因拟南芥材料,进而对这些材料连续两代回交,并对每代材料进行室内生物测定,分析回交次数对Bt基因抗虫性的影响。主要结果如下:1.对转MTI2基因材料进行连续5代的卡那霉素筛选和PCR检测,共获得100株纯合阳性植株,且每个阳性植株都收获了大量种子。2.两种转基因材料抗小菜蛾生物测定结果显示:转MTI2基因材料不能有效抗虫,仅对害虫生长起抑制作用;转化改良的SN19基因材料抗虫性很强,对小菜蛾有很高的致死率,该基因可作为今后蔬菜抗鳞翅目害虫育种的候选基因。3.通过对Bt转基因材料连续2代的回交分析和生物测定结果显示,回交会使转基因材料的抗虫性下降,而且在回交第二代时下降显著,今后对转Bt基因植物进行回交改良其农艺性状时,应尽量减少回交次数,少次回交转基因材料的抗虫效果仍然保持很高的抗水平。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 植物利用的抗虫基因及其转基因研究进展
• 1.1.1 BT基因及转基因研究进展
• 1.1.2 蛋白酶抑制剂基因及转基因研究进展
• 1.1.3 植物凝集素（LECTIN）基因及转基因研究进展
• 1.1.4 其他类抗虫基因及几种广泛应用的抗虫基因的抗虫范围
• 1.2 抗虫转基因植物后代鉴定检测方法
• 1.2.1 选择标记基因和报告基因检测
• 1.2.2 分子检测
• 1.2.3 免疫技术检测
• 1.2.4 生物测定
• 1.3 回交次数对转BT 基因植物的抗虫性影响
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 研究方法
• 2.2.1 转基因植株卡那霉素筛选
• 2.2.2 筛选后抗性苗的培养
• 2.2.3 转基因纯合系的获得
• 2.2.4 转基因植株分子检测
• 2.2.5 2 种转基因材料室内生物测定
• 2.2.6 转BT基因拟南芥回交后代的获得
• 2.2.7 实验药品与仪器
• 3 结果与分析
• 3.1 卡那霉素筛选纯化结果
• 3.2 抗性植株的PCR 检测结果
• 3.2.1 DNA 提取结果
• 3.2.2 PCR 扩增结果
• 3.3 抗虫性生物测定结果
• 3.4 转BT 拟南芥回交后代的抗虫性鉴定结果
• 4 讨论
• 4.1 卡那霉素筛选最适浓度
• 4.2 卡那霉素筛选转基因植株的有效性
• 4.3 关于转MT12 基因拟南芥生物测定低毒性的表现
• 4.4 转 BT基因材料回交后代毒性降低的问题
• 4.5 BT 转基因材料回交改良中最佳回交次数的确定
• 5 结论
• 致谢
• 附图
• 参考文献
• 作者简介