慢性EAE模型T-bet/GATA-3的平衡失调及TGF-β1对其调节的相关研究

慢性EAE模型T-bet/GATA-3的平衡失调及TGF-β1对其调节的相关研究

论文摘要

目的:运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定慢性EAE模型C57BL/6小鼠脑和脾中T-bet、GATA-3以及T-bet/GATA-3比率的动态变化;并用TGF-β1进行干预,观察上述指标的变化,以探讨T-bet、GATA-3和T-bet/GATA-3比率在慢性EAE/MS病程中的作用。方法:72只8-10周健康雌性C57BL/6小鼠,随机分为佐剂对照组、致病组、干预组和假干预组。各组小鼠又分为发病初期、发病高峰期和慢性期。用MOG35-55、自制的完全弗氏佐剂和百日咳毒素免疫小鼠制成慢性EAE动物模型。在免疫同时,干预组每只小鼠多天多点注射TGF-β1。假干预组用PBS代替TGF-β1注射。免疫后按Benson评分标准对EAE严重性进行临床评估。RT-PCR技术观察各组不同时期脑和脾中T-bet、GATA-3的表达变化以及T-bet/GATA-3比率的动态变化。结果:1.动物模型干预组较致病组发病提前、高峰症状明显、更趋于进入慢性期。假干预组的临床表现和发病特点同致病组。佐剂对照组Benson标准评分为0分。2.T-bet各个时期致病组、假干预组和干预组脑和脾中T-bet表达均高于佐剂对照组,发病高峰期表达最强,且干预组较相应时期致病组要低。3.GATA-3各个时期致病组、假干预组和干预组脑和脾中GATA-3表达低于佐剂对照组,发病高峰期表达最低。干预组每个时期均较相应时期致病组要低。4.T-bet/GATA-3致病组、假干预组和干预组小鼠的脑和脾中T-bet/GATA-3的比率明显高于佐剂对照组,其中发病高峰期比率增高最显著。干预组较致病组变化幅度较致病组大。与致病组相比,发病高峰期该比值明显大于致病组,但高峰期过后该比值下降较致病组快,到慢性期该比值小于致病组。5.T-bet、GATA-3和T-bet/GATA-3的比较无论是致病组还是干预组,T-bet/GATA-3比率比率的变化幅度均较单独的T-bet或GATA-3明显,求更符合临床症状。结论:1.T-bet/GATA-3的比率较单独的T-bet或GATA-3更敏感的反映EAE的病情变化,T-bet/GATA-3的失衡表达可能是EAE或MS形成的重要原因之一。2.TGF-β1直接或间接抑制T-bet和GATA-3的表达,外源性TGF-β1对慢性EAE产生较复杂的影响,可以使EAE小鼠发病高峰前移,病情加重明显,并更趋于缓解。

论文目录

  • 一、中文摘要
  • 二、英文摘要
  • 三、缩略词简表
  • 四、正文
  • 前言
  • 第一章 材料与方法
  • 1.1 主要试剂与药品
  • 1.2 主要仪器及耗材
  • 1.3 动物的准备
  • 1.4 动物分组
  • 1.5 建立慢性 EAE模型
  • 1.6 模型评价
  • 1.7 逆转录聚合酶链反应
  • 1.8 分析及统计方法
  • 第二章 结果
  • 2.1 实验小鼠行为及形态学变化
  • 2.2 实验小鼠发病率、体重及临床评分
  • 2.3 实验小鼠病理观察
  • 2.4 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)
  • 2.4.1 总 RNA提取
  • 2.4.2 T-bet、GATA-3及 T-bet/GATA-3比率
  • 附图
  • 第三章 讨论
  • 一、转录因子 T-bet和 GATA-3在 EAE小鼠脑和脾中的表达水平
  • 二、TGF-β1干预后 EAE小鼠脑和脾中T-bet和 GATA-3表达变化
  • 第四章 结论
  • 参考文献
  • 五、综述
  • 六、致谢
  • 相关论文文献

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