论文摘要
目的：通过基因沉默方法研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小干扰RNA（siRNA）重组质粒pSUPERsiHIF-1α对小鼠视网膜HIF-1α表达及视网膜新生血管的抑制作用。方法：（1）构建HIF-1α特异性siRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α。（2）选择7d龄C57BL／6J小鼠48只，其中12只为正常组（A组）；另36只按照Smith的方法建立氧诱导的视网膜新生血管模型，并随机分为：对照组（B组）、空载体组（C组）和基因治疗组（D组），每组12只。于出舱前1d，向空载体组小鼠玻璃体腔注射pSUPER空载体质粒；基因治疗组注射重组质粒pSUPERsiNIF-1α。（3）采用FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察4组小鼠视网膜血管形态变化。（4）RT-PCR检测各组视网膜组织中HIF-1αmRNA的表达水平。（5）SP免疫组织化学检测各组间HIF-1α蛋白质的表达差异。结果：（1）荧光造影视网膜铺片显示，A组整个视网膜血管分布呈均匀网状；B、C组视网膜中周部可见大片无灌注区，见新生血管丛，伴荧光渗漏；D组无灌注区及新生血管丛较B、C组明显减少，视网膜血管网状结构基本正常。（2）RT-PCR结果显示，B、C组视网膜HIF-1αmRNA表达较A组明显上调，而D组视网膜组织中HIF-1αmRNA表达较B组下调，抑制效率为57.1％，差异有统计学意义（P＜0.01）。（3）免疫组织化学染色显示，HIF-1α阳性表达定位于细胞核，A组HIF-1α蛋白表达阴性；B、C组在神经节细胞层呈阳性表达；D组在神经节细胞层呈弱阳性表达，较B、C组明显减少，抑制效率为51.5％。结论：以低氧反应启动元件HIF-1α为靶点，采用玻璃体腔注射，通过脂质体介导HIF-1α特异性siRNA重组质粒pSUPERsiHIF-1α转染视网膜，明显下调了视网膜HIF-1α的表达，有效地抑制了氧诱导小鼠视网膜新生血管的形成。