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pshuttle-Egr1-hSmac基因—放射治疗乳腺癌的体外抑瘤效应研究

2020-12-11阅读(217)

pshuttle-Egr1-hSmac基因—放射治疗乳腺癌的体外抑瘤效应研究

论文摘要

乳腺癌的临床治疗包括手术、放疗和化疗,浸润性导管癌是浸润性乳腺癌中最大的一类,研究其靶向治疗具有重要的临床意义。肿瘤基因-放射治疗是近年来肿瘤靶向治疗的研究热点之一,是根据放射治疗和基因治疗的各自特点,将二者联合应用,即将辐射诱导性基因的调控序列与肿瘤杀伤基因相偶联,转染肿瘤细胞,在对肿瘤实施局部放疗的同时诱导肿瘤杀伤基因表达的增强,产生辐射和基因表达产物的协同抑瘤作用。该疗法一方面将放疗与基因治疗有机地结合,发挥协同作用；另一方面,由于辐射具有靶向性和可控性,实现了对杀伤基因表达的时空调控。本实验充分利用Egr-1启动子具有辐射诱导特性,构建了含Egrl启动子和Smac基因的重组质粒pshuttle-Egrl-hSmac,转染人乳腺浸润性导管癌细胞MCF-7和MDA-MB-435,研究在电离辐射诱导下,该重组质粒携带的基因Smac mRNA及蛋白表达的时效和量效规律。进而观察其联合X射线照射后,对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-435增殖、细胞放射敏感性、细胞周期进程和细胞凋亡等生物学特性的影响,从而评价该质粒联合X射线对人乳腺浸润性导管癌的杀伤效果。结果表明,重组质粒pshuttle-Egrl-hSmac中Smac mRNA和蛋白的表达具有辐射诱导表达特性,且在联合X射线照射后,对MCF-7和MDA-MB-435细胞具有明显的增殖抑制、辐射增敏和促凋亡作用,并可改变细胞周期进程；为提高基因-放射治疗效果开辟了新途径,为基因-放射治疗的临床应用提供理论和实验依据。

论文目录

  • 内容提要
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 英文缩略词
  • 第1章 绪论
  • 1.1 基因治疗及其研究进展
  • 1.1.1 基因治疗的定义
  • 1.1.2 基因治疗的国内外发展现状
  • 1.1.3 基因治疗的途径
  • 1.1.4 基因治疗导入系统
  • 1.1.5 非病毒载体系统
  • 1.1.6 基因治疗技术中存在的问题
  • 1.1.7 基因治疗技术展望
  • 1.2 肿瘤基因治疗及其研究进展
  • 1.2.1 免疫基因治疗
  • 1.2.2 抑癌基因治疗
  • 1.2.3 自杀基因治疗
  • 1.2.4 抗血管生成基因治疗
  • 1.3 肿瘤基因-放射治疗及其进展
  • 1.3.1 肿瘤基因-放射治疗的概念
  • 1.3.2 肿瘤基因-放射治疗的作用机制
  • 1.4 EGR-1基因与肿瘤基因-放射治疗研究进展
  • 1.4.1 Egr-1基因及蛋白的结构特点
  • 1.4.2 Egr-1基因的辐射诱导特性
  • 1.4.3 Egr-1基因启动子与TNF-α连接
  • 1.4.4 Egr-1基因启动子与自杀基因的连接
  • 1.4.5 Egr-1基因启动子与其他肿瘤杀伤基因连接
  • 1.5 肿瘤基因-放射治疗存在的问题及展望
  • 1.6 SMAC基因与肿瘤
  • 1.6.1 Smac基因概述
  • 1.6.2 Smac的促凋亡机制
  • 1.6.3 Smac与肿瘤的关系
  • 1.7 本研究的立题依据
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 主要试剂及器材
  • 2.1.1 试剂
  • 2.1.2 器材
  • 2.1.3 主要仪器
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 实验样品及制备
  • 2.2.2 细胞生物学实验
  • 2.2.3 分子生物学实验
  • 2.3 统计学方法
  • 第3章 实验结果
  • 3.1 PSHUTTLE-EGR1-HSMAC质粒的构建
  • 3.1.1 目的基因的获得
  • 3.1.2 重组基因质粒pshuttle-Egr1-Smac的构建及鉴定
  • 3.2 X射线照射后重组质粒在MCF-7和MDA-MB-435细胞中的辐射诱导表达规律
  • 3.2.1 X射线照射后重组质粒转染的MCF-7和MDA-MB-435细胞中SmacmRNA表达的时程变化
  • 3.2.2 不同剂量X射线照射后重组质粒转染的MCF-7和MDA-MB-435细胞中 SmacmRNA表达的量效变化
  • 3.2.3 重组质粒转染的MCF-7和MDA-MB-435细胞中Smac蛋白表达变化
  • 3.3 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞作用的实验研究
  • 3.3.1 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞生长抑制的时程效应
  • 3.3.2 重组质粒联合不同剂量X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞生长抑制的剂量效应
  • 3.3.3 细胞的生长曲线
  • 3.3.4 细胞剂量存活曲线
  • 3.3.5 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞凋亡的影响
  • 3.3.6 重组质粒联合X射线照射对MCF-7细胞周期的影响
  • 第4章 讨论
  • 4.1 乳腺癌基因-放射治疗理论基础
  • 4.2 实验方法的可行性
  • 4.3 目的基因的获得和重组质粒的构建
  • 4.3.1 Egr-1启动子的获得
  • 4.3.2 hSmac基因的获得
  • 4.3.3 Egr-1介导的人Smac重组载体的构建
  • 4.4 重组质粒转染MCF-7和MDA-MB-435细胞后辐射表达规律
  • 4.4.1 重组质粒转染的MCF-7和MDA-MB-435细胞中Smac mRNA的变化
  • 4.4.2 重组质粒转染的MCF-7和MDA-MB-435细胞中Smac蛋白表达的变化
  • 4.5 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞的生物性特性的研究
  • 4.5.1 重组质粒联合X射线照射对MCF-7细胞活性的影响
  • 4.5.2 重组质粒的克隆形成能力
  • 4.5.3 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞凋亡的影响
  • 4.5.4 重组质粒联合X射线照射对MCF-7和MDA-MB-435细胞周期的影响
  • 结论
  • 参考文献
  • 作者简介及攻博期间发表的学术论文及其他成果
  • 致谢

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