双黄连粉针剂和口服液指纹图谱的建立及其体外代谢初步探讨

论文摘要

目的建立注射用双黄连粉针剂及口服液的指纹图谱的高效液相色谱分析方法,分别对10批双黄连粉针剂及口服液进行相似性评价;考察三种不同溶媒溶解双黄连粉针剂对其指纹图谱的影响;通过建立体外代谢指纹图谱,分别对双黄连粉针剂及双黄连口服液在大鼠肝微粒体体外代谢进行初步探讨。方法利用Agilent1200高效液相色谱仪四元泵系统及紫外检测器进行梯度洗脱,选用C18（150mm×4.6mm,5μm）色谱柱,通过考察多种不同流动相系统和梯度洗脱程序,最终确定甲醇（A）—0.25%冰醋酸（B）为流动相系统,优选的梯度洗脱程序为:015 min,流动相A为15% 35%;1520 min,A为35%;20 50 min,A为35% 100%.流速1.0ml·min-1,检测波长350 nm,柱温30℃,进行梯度洗脱分离。分别将双黄连粉针剂、双黄连口服液、对照品用50%甲醇溶解或稀释成一定浓度,进样20μl,检测其60 min的指纹图谱;将溶于0.9%NaCl注射液和10%葡萄糖注射液的注射用双黄连粉针剂及10个不同批号的注射用双黄连粉针剂及双黄连口服液用上述方法进行指纹图谱考察。制备大鼠肝微粒体,并测定其蛋白含量,孵化体系中蛋白含量为1 mg·mL-1,分别对注射用双黄连、双黄连口服液、指标成分对照品进行孵化,在0 min,10 min,20 min,30 min,60 min取样100μl,加入两倍量冰冷甲醇终止反应,在4000×g离心10 min后,取上清液作为样品,按上述的色谱条件进行体外代谢指纹的建立。结果得到双黄连粉针剂、双黄连口服液及其对照品的指纹图谱,并对其质量控制指标成分进行归属,以黄芩苷峰作为参照峰,对建立的高效液相色谱方法进行精密度、重复性考察,同时对样品的稳定性进行考察,结果主要共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%。通过对双黄连粉针剂在三种溶媒中指纹图谱相似性的评价,结果相似度大于0.97。分别对十批注射用双黄连及双黄连口服液进行相似性评价,结果相似度均大于0.97。对双黄连两种制剂代谢指纹图谱的研究结果发现主要有效成分黄芩苷在肝微粒体中发生代谢转化,并且得到不同于黄芩素的产物。结论建立的注射用双黄连及双黄连口服液的高效液相色谱分析方法具有良好的重现性,专属性,能客观的反映双黄连制剂中指标成分。通过对双黄连粉针剂在三种不同溶媒中指纹图谱相似性研究发现,溶媒对其对粉针剂化学成分的影响在指纹图谱无体现。应用建立的方法用于考察双黄连制剂的质量稳定性,同时也可对产品批次间的差异进行评价。应用代谢指纹图谱,考察制剂在大鼠肝微粒体中的代谢,为进一步研究体内代谢,确定双黄连粉针剂及双黄连口服液的药效物质奠定基础,同时也为探索双黄连制剂致不良反应机制、研究药物的安全性和有效性提供新的思路。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 双黄连粉针剂及双黄连口服液化学指纹图谱的建立
• 1.1 仪器和试剂
• 1.2 方法和结果
• 1.3 讨论
• 第二章 双黄连粉针剂及双黄连口服液大鼠肝微粒体中体外代谢初步探讨
• 2.1 仪器和试剂
• 2.2 方法和结果
• 2.3 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢