论文摘要
第一部分:基质金属蛋白酶底物肽的合成和检测目的:分别制备对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）高度敏感的MMP（W）X肽和对MMP-2不敏感的MMP（DF） X肽,进行相关检测。方法:采用Fmoc固相合成法制备MMP（W）X肽和MMP（DF） X肽,MMP（W）X肽的氨基酸序列为Ac-CRD-GPQG↓IWGQ-DRC-NH2,MMP（DF） X肽的氨基酸序列为Ac-CRD-GDQGIAGF-DRC-NH2。采用高效液相色谱法和质谱进行鉴定。结果: MMP（W）X肽高效液相色谱分析其纯度为99.06%,质谱检测分子量为1632.79/摩尔;MMP（DF）X肽高效液相色谱分析其纯度为99.29%,质谱检测分子量为1553.69/摩尔。结论:MMPs底物肽能够体外合成并用于组织工程研究。第二部分:基质金属蛋白酶底物肽聚乙二醇复合水凝胶的制备及性质研究目的:采用分子量20,000Da丙烯酰化四分枝状聚乙二醇（4-arm-PEG-Ac）和基质金属蛋白酶底物肽制备可降解复合水凝胶,并检测其性能。方法:利用已制备的基质金属蛋白酶底物肽,联合丙烯酰化四分枝状聚乙二醇制备浓度为10%（w/v）的复合水凝胶。MMP（W）X肽复合PEG水凝胶为实验A组,MMP（DF） X肽复合PEG水凝胶为实验B组,对照C组为单纯PEG水凝胶。比较三种水凝胶在37℃磷酸盐缓冲液中的降解情况,再外源性添加MMP-2,观察三种水凝胶降解情况。检测三组水凝胶的细胞毒性。在制胶过程中包埋转化生长因子（TGF-β1）,检测各组水凝胶对TGF-β1的缓释效果。结果:磷酸盐缓冲液中A、B、C三组水凝胶4周累计降解率分别为68.36%、64.23%、66.28%,三者差异无统计学意义（P>0.05）;分别添加MMP-2,A组4周累计降解率为83.75%,降解速度加快,B、C组则变化不明显。MTT法检测复合PEG水凝胶无细胞毒性。A、B、C三组水凝胶TGF-β17天累计释放率分别为59.63%、53.18%、44.36%,三者差异无统计学意义（P>0.05）;分别添加MMP-2后,A组对TGF-β1释放速度明显加快。结论: MMPs底物肽PEG复合水凝胶结构稳定、对细胞无毒性。其中对MMP-2敏感型复合PEG水凝胶对生长因子TGF-β1有良好的控释效果,有望应用于新型组织工程心脏瓣膜支架材料的研制。第三部分: MMP-2敏感型聚乙二醇水凝胶联合去细胞瓣制备复合支架目的:制备对MMP-2敏感型聚乙二醇水凝胶去细胞瓣复合支架,并检测其相关生物学性能。方法:采用酶+去污剂法制备去细胞瓣。在MMP-2敏感型聚乙二醇水凝胶成胶过程中,利用化学交联剂碳化二亚胺（EDC）将复合水凝胶与去细胞瓣充分耦联,制备复合支架。进行HE染色和电镜扫描观察与DNA含量、羟脯氨酸含量以及瓣叶生物力学检测。结果:形态学观察见复合支架细胞外基质紧密,胶原纤维结构整齐、紧凑。与单纯去细胞瓣相比较,复合支架的DNA含量、羟脯氨酸含量差异无统计学意义（P>0.05）,但瓣叶生物力学性能提高。结论: MMP-2敏感型聚乙二醇水凝胶联合去细胞瓣制备的复合支架,保持去细胞瓣基本特征的同时有助提高生物力学性能,有利于组织工程心脏瓣膜的构建。
论文目录
相关论文文献
标签：基质金属蛋白酶论文; 酶降解论文; 四分枝状聚乙二醇论文; 水凝胶论文; 去细胞瓣膜论文; 复合支架论文; 组织工程心脏瓣膜论文; 力学性能论文;