论文摘要
肝素酶（Heparanase，HPA）是一种β-葡萄糖苷内切酶，特异性降解细胞外基质和血管基底膜中硫酸肝素蛋白多糖（heparan sulfate proteoglycans，HSPGs）的降解，破坏组织和血管的完整性，释放结合于硫酸肝素上的bFGF、VEGF等生物活性分子，与肿瘤转移密切相关，近年来成为肿瘤诊断和治疗的重要研究对象。本实验采用RNA干扰（RNAi）技术研究肝素酶与肿瘤生物学行为的关系。通过肝素酶siRNA抑制肝癌细胞HepG2中肝素酶的表达，得到了肝素酶低表达的HepG2细胞株。采用流式细胞术、western blot、RT-PCR、免疫组化等方法对细胞鉴定的结果表明，实验组肝癌细胞肝素酶基因和蛋白表达明显降低；将实验组和对照组细胞接种裸鼠皮下所获得的成肿瘤数据表明，实验组成瘤速度明显减缓、瘤重下降；肿瘤组织的免疫组化结果显示，对照组肿瘤组织肝素酶呈强阳性，实验组呈弱阳性。实验结果验证了肝素酶在肿瘤生长过程中的重要作用，提示RNAi技术对肝素酶表达及成瘤性具有抑制效果，说明RNA干扰技术用于临床肿瘤的治疗具有很大的潜力。采用抗原优势表位的预测、合成肝素酶优势抗原多肽，用杂交瘤技术制备了能够稳定分泌抗人肝素酶单克隆抗体的杂交瘤细胞，采用western blot和免疫组化方法进行鉴定抗体特性，结果显示所生产的单克隆抗体可以特异性识别人肝素酶，能够反映组织内的肝素酶含量，可以用于对肿瘤组织细胞内肝素酶水平的分析。