乌拉地尔对大鼠心室肌细胞快钠离子通道的影响

论文摘要

目的:心律失常在心血管系统疾病中较常见,轻者可无任何症状,重者影响患者血流动力学,且多与其他心血管疾病同时存在,而恶性心律失常是猝死的常见原因,严重威胁人们的生命健康。目前的抗心律失常药物大部分都具有致心律失常作用,且CAST实验证实某些Ⅰ类抗心律失常药物可增加心肌梗死患者死亡率。交感-肾上腺素系统激活在各种心血管疾病的发生、发展中具有重要的作用,心律失常也不例外,但长期以来,β肾上腺素受体（β-AR）阻滞剂由于其在心血管方面的有益作用而受到了广泛关注,α肾上腺素受体（α-AR）阻滞剂的作用却被忽略了。其实α-AR阻滞剂在治疗高血压及心力衰竭方面有其独到的优势。并且早在1953年,Leimdorfer首先报道了α-AR阻滞剂酚妥拉明具有抗心律失常作用,最近的动物实验也表明α和β肾上腺素系统在心律失常的发生过程中起协同作用,但具体的作用机制尚不清楚。交感-儿茶酚胺系统在急性心肌缺血早期心律失常的发生、发展中具有重要作用,急性心肌缺血时交感神经系统活性及儿茶酚胺释放明显增加,交感神经切除可明显降低心肌缺血早期恶性心律失常如室速（VT）,室颤（VF）发生率,但β-AR阻滞剂并不能有效降低心肌缺血早期恶性心律失常发生率,α受体激动在心肌缺血早期具有重要的致心律失常作用,但是其致心律失常的具体作用机制不清。离子通道是心肌电信号传导的基础,心律失常的发生与离子通道有密切的关系。本实验的目的就是酶解法分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录方法,研究心肌细胞快钠离子通道电流（INa）活性的变化及乌拉地尔对其的影响,从而探讨其是否有抗心律失常作用。方法:1实验动物SD大鼠40只,雌雄不拘,体重150-250g之间,由河北医科大学实验动物中心提供。2细胞分离利用酶解（胶原酶I,Gibco公司）的方法分离心室肌细胞。3细胞的选取选取结构清晰,横纹明显,呈长杆状的细胞,这样的细胞容易封接和破膜。4分组及给药方法随机分为正常对照组,乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)及乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L),每组15个细胞,分别用含有不同浓度乌拉地尔的细胞外液灌流细胞,流速为2ml/min,大约3-5分钟。5电流记录应用膜片钳全细胞记录方法,记录乌拉地尔高浓度(5×10-4mmol/L)及低浓度(5×10-5mmol/L)作用下心室肌细胞INa活性的变化,并与正常对照组进行比较分析。电流记录的刺激程序由pulse+pulsefit软件控制,通道信号经EPC-9膜片钳放大器放大,通过Ag-AgCl电极丝和填充电极内液的微电极导入细胞,产生的电流信号经EPC-9转换,为pulse+pulsefit软件采集、分析。6统计学分析采用SPSS17.0软件进行统计学处理,计量数据以均数±标准差（ x±s）表示,成组资料比较采用方差分析,组内比较采用两样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1乌拉地尔对心室肌细胞INa I–V曲线的影响观察对照组、乌拉地尔低浓度组、高浓度组三组细胞INa的I–V曲线,均在–70 mV激活,–40 mV达峰值,+50 mV时反转。应用乌拉地尔干预组与对照组相比,I–V曲线上移,以乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)上升更明显。但INa电压依赖性不变,对激活电位、峰值电位、反转电位及I-V曲线的形态轨迹均无影响。INa峰值电流密度（–40 mV）的比较显示:对照组为-48.74±2.66pA/pF（n=10cells）,乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)为-29.86±1.37 pA/pF （n=10cells）,峰值电流密度较对照组降低（P<0.05）;乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)INa峰值电流密度为-14.44±8.21pA/pF（n=10cells）,该组INa峰值电流密度的下降更明显,较对照组降低（P<0.05）。乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)INa峰值电流密度比低浓度组(5×10-5mmol/L高（P<0.05）。2乌拉地尔对心室肌细胞INa稳态失活曲线的影响INa电压依赖性稳态失活曲线,乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)、乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)与正常对照组相比,失活曲线明显左移（即向超极化方向移动）,以乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)左移更加明显。最大半数失活电压（V0.5）对照组为–76.41±2.84mV（n=10cells）,乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)V0.5为–96.04±1.85 mV（n=10cells）,与对照组和乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)比较均相差显著, （P<0.05） ;乌拉地尔高浓度组（ 5×10 - 4）mmol/L )为–109.12±1.58mV（n=10cells）,与对照组比较有非常显著的差异（P<0.05）。3乌拉地尔对心室肌细胞INa失活后再恢复曲线的影响三组细胞INa失活后再恢复过程,当两个脉冲间隔时间为25ms时,对照组INa恢复79.64%,乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)恢复53.27%,而乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)仅恢复43.50%,而当两个脉冲间隔时间为85ms时,对照组恢复99.82%,而乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L恢复80.00%,乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L仅恢复69.91%,当两个脉冲间隔时间为145ms时,对照组INa恢复100%,乌拉地尔低浓度组(5×10-5mmol/L)恢复90.90%,乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L恢复86.90%。说明乌拉地尔高浓度组(5×10-4mmol/L)和低浓度组（5×10-5）mmol/L)INa再恢复明显减慢,再恢复时程延长,和对照组比较有显著性差别（P<0.05）。结论:1本研究通过研究不同浓度选择性α1肾上腺素受体阻滞剂乌拉地尔对正常大鼠心室肌细胞干预后,其对快钠离子通道（INa）的影响,与对照组相比,乌拉地尔干预后心室肌细胞发生了一系列心电学方面的变化,如INa电流活性降低,膜电位降低、动作电位0位相上升速度下降、动作电位时程及心室有效不应期延长,减慢传导,终止折返,说明乌拉地尔可能通过其对INa通道的影响起到一定的抗心律失常作用。2不同浓度的乌拉地尔对INa的作用不同,高浓度的乌拉地尔对INa的抑制作用更明显,说明乌拉地尔的药理作用在一定范围内呈剂量依赖性。3心律失常的形成机制并不是单一的,各离子通道的作用也不是孤立的,所以乌拉地尔是否有抗心律失常作用及其具体作用机制尚需进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 乌拉地尔对大鼠心室肌细胞快钠离子通道的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 乌拉地尔在心血管方面的临床应用及研究进展
• 致谢
• 个人简历