论文题目: 悬浮培养293细胞生产腺病毒的工艺及BB102抗癌剂治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 病理生理学
作者: 吴彬
导师: 吴祖泽
关键词: 腺病毒,基因治疗,分离纯化,肺癌
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 第一部分 在最近的十几年中,腺病毒已经成为了基因治疗的有效载体。到目前为止,世界各国已经批准的基因治疗临床方案达到1000多个,腺病毒载体约占26%。由于越来越多的腺病毒基因药物进入临床前和临床实验,急需建立一种有效的可以放大的腺病毒生产工艺,生成出足量的符合临床使用标准的腺病毒基因药物产品。持续灌注悬浮培养293细胞是目前生产腺病毒最常用的方法之一,这种方法特别适合于工业化生产。我们对灌注培养293细胞生产携带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒载体进行了实验研究,结果表明,灌注率为1.5-2vol/d比较适宜;感染Ad-GFP后48小时是收获细胞的最佳时机,此时的单细胞病毒含量在18200±1700VP/cell左右;细胞密度在3.0×10~6/ml左右感染病毒时单细胞病毒和单位体积病毒产量均较高。通过上述实验我们初步建立起了利用5L生物反应器悬浮培养293N3S细胞生产Ad-GFP的生产工艺,可以获得较大量高滴度的Ad-GFP。 第二部分 重组腺病毒纯化的传统方法是氯化铯密度梯度超速离心,此方法产量小,更重要的是这种方法不能有效放大,不适合工业化生产。近年来应用阴离子交换树脂已经逐渐成为了主要分离纯化手段并取得了比较好的结果。我们应用两步阴离子色谱法进行了重组腺病毒Ad-GFP的分离与纯化,首先用Q Sepharose XL对含有腺病毒的细胞裂解液进行第一次分离纯化,然后将含有Ad-GFP的流出液用Source 15Q进行第二次分离纯化。实验结果显示,经Q Sepharose XL第一次分离纯化可以有效地去除细胞裂解液中的部分杂蛋白,但不能获得较纯重组腺病毒Ad-GFP,再次经Source 15Q纯化后可以获得理想的重组腺病毒,最终的腺病毒回收率在50%左右,产品经高压液相及丙烯酰胺凝胶电泳分析得到了证实,与氯化铯密度梯度离心法获得的腺病毒相似。此方法省
论文目录:
缩略词表
中文摘要
英文摘要
主要仪器设备及常用试剂
前言
第一部分 悬浮培养293细胞生产重组腺病毒
材料
方法
结果
讨论
参考文献
第二部分 重组腺病毒载体 Ad-GFP的分离与纯化
材料
方法
结果
讨论
参考文献
第三部分 BB-102抗癌剂对 C57小鼠Lewis肺癌治疗作用的实验研究
材料
方法
结果
讨论
参考文献
综述
基因治疗的腺病毒载体生产
腺病毒生产工艺的建立与优化
致谢
发布时间: 2005-11-28
参考文献
- [1].键合紫杉醇纳米微粒治疗小鼠Lewis肺癌的实验研究[D]. 王晓军.吉林大学2007
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