大肠杆菌偏嗜性人促甲状腺激素（hTSH）β亚基编码DNA序列的克隆与表达

论文摘要

促甲状腺激素（thyroid-stimulating hormone，TSH）是腺垂体分泌的一种糖蛋白激素，由α和β两个亚基组成。其中β亚基携带TSH特异的生物学信息。TSH通过与促甲状腺激素受体（TSH receptor，TSHR）结合而促进甲状腺激素（TH，thyroid hormone）的合成与释放。临床上，TSH与甲状腺功能异常有着密切联系。在GD（Graves disease）患者血清中检测到一种免疫球蛋白，可与甲状腺细胞膜TSHR结合，促进TH合成与分泌增多。独特型—抗独特型免疫网络学说认为这种免疫球蛋白是由TSHAb1诱生的TSHAb2。因此，获得足够量的TSH，制备TSHAb1、TSHAb2，进而构建GD动物模型，对深入探索GD的病因和发病机理至关重要。天然人TSH（hTSH）来源有限、产量甚微，且人垂体的收集也十分有限，因此，借助基因工程来完成，是可取的途径。本文依据遗传密码具有兼并性的特点，在不改变氨基酸序列的条件下，用大肠杆菌基因序列中使用频率高的密码子取代hTSHβ亚基（hTSHβ）基因编码序列中的弱密码子，并将修改后的序列进行人工化学合成，获得大肠杆菌偏嗜性hTSHβ的全编码序列。构建pGEX-3X/大肠杆菌偏嗜性hTSHβ和pQE-30／大肠杆菌偏嗜性hTSHβ两种原核重组表达载体。测序鉴定后，分别转化入E．coli DH5α和E．coliM15[pREP4]中进行融合表达。SDS-PAGE电泳查看表达产物大小和表达量，Western-blotting进一步鉴定。表达条件经优化后，重组蛋白GST-hTSHβ占碎菌沉淀总蛋白的26.57％。目的蛋白含GST纯化标签，经GST亲和层析纯化后，获得较纯的重组蛋白。纯化产物经电化学发光免疫测定（Electrochemiluminescence immunoassay，ECLI）初步定量。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 实验流程
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录