论文摘要
目的：本实验旨在研究外周炎症时下丘脑弓状核（hypothalamic arcuate nucleus, ARC）产生中枢敏感化的谷氨酸受体机制,重点探讨NMDA受体NR2B亚单位和Src蛋白酪氨酸激酶在其中的作用。方法：用完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant, CFA）建立大鼠外周炎症模型；用压爪-缩腿法和辐射热-缩腿法测定大鼠痛阈变化；用电生理学方法进行细胞外记录离体下丘脑内侧基底部脑片ARC神经元的自发单位放电,并观察NMDA受体拮抗剂MK-801、NMDA受体NR2B亚单位拮抗剂Ro25-6981和Src蛋白酪氨酸激酶拮抗剂PP2对自发放电的影响；用Western Blot方法检测ARC区磷酸化的NR1（pNR1）、NR2B（pNR2B）、Src（pSrc）以及总NR1和NR2B蛋白的表达；用免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）检测NR2B和pSrc的相互作用；观察ARC微量注射PP2后炎症大鼠痛阈变化和磷酸化NR2B的蛋白含量变化。结果：CFA炎症大鼠的痛阈明显低于正常大鼠（P<0.01）,表现为压爪机械缩腿阈值降低和辐射热缩腿潜伏期缩短,即出现痛觉过敏；外周CFA炎症时,ARC神经元自发放电频率明显高于正常大鼠（P<0.01）,表现神经元兴奋性增高；MK-801、Ro25-6981和PP2能部分翻转炎症大鼠ARC神经元的自发放电频率的升高；炎症大鼠ARC内Src蛋白酪氨酸激酶以及NMDA受体NR2B亚单位的磷酸化水平上调；免疫共沉淀显示,炎症大鼠ARC内pSrc和NR2B存在着相互作用；并且ARC内微量注射PP2后,NR2B的磷酸化水平下调,大鼠的痛阈也明显提高。结论：（1）外周CFA炎症时,ARC神经元的兴奋性提高,大鼠的痛阈下降,出现痛觉过敏；（2）中枢NMDA受体及其NR2B亚单位参与炎症大鼠ARC神经元的兴奋性提高；（3）Src蛋白酪氨酸激酶通过激活NMDA受体NR2B亚单位的磷酸化,在炎症大鼠ARC中枢敏感化中发挥重要作用；（4）ARC作为脊髓以上水平调节痛觉的一个高位中枢,在外周炎症时产生中枢敏感化的机制之一,可能是炎症导致ARC中Src蛋白酪氨酸激酶激活,后者通过磷酸化NR2B亚单位来提高NMDA受体的敏感性,从而使ARC神经元兴奋性提高。