陕西部分地区零售肉及凉拌菜中大肠杆菌的特性研究

论文摘要

目前,由于抗生素的广泛使用,使得细菌的耐药性现象比较严重,耐药性菌株的扩散、传播及多重耐药菌株的出现对临床上疾病的治疗带来巨大的挑战,使得人的健康受到威胁。细菌可通过食物链污染人体,因此对食品中细菌的耐药性进行调查和监测具有重要意义。大肠杆菌是温血动物肠道常在菌,其不仅是食品卫生程度的重要指标,还是耐药性检测的良好指示菌。本研究对采自陕西西安及杨陵地区的食源性大肠杆菌进行分离、鉴定,对其耐药性、致病性大肠杆菌存在情况、整合子及耐药性水平传递进行研究。所得结果如下:1.本研究从采自陕西西安市及杨凌示范区各大超市和农贸市场的357份鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉和凉拌菜样品中共分离出大肠杆菌748株,大肠杆菌的污染率为89%。药敏试验结果显示:大肠杆菌分离株对链霉素的抗性最高（88.2%）,其次为四环素（84.4%）、甲氧苄啶-新诺明（64.4%）、萘啶酮酸（62.6%）、氨苄西林（56.0%）、环丙沙星（39.2%）、氯霉素（37.6%）、卡那霉素（34.9%）、庆大霉素（34.2%）、阿莫西林-克拉维酸（28.9%）、加替沙星（26.9%）。所有受试菌株对阿米卡星的耐药性最低为8.3%,其次为头孢西丁（11.5%）,头孢曲松（13.8%）,头孢哌酮（19.5%）。多重耐药大肠杆菌（≥3）分离率为73.9%。不同来源菌株均存在多重耐药菌株,本研究中多重耐药大肠杆菌在鸡肉源菌株中比较严重,多重耐药菌株的分离率达92.1%,且对所试15中抗生素全部耐药的菌株均分离自鸡肉。多重耐药菌株的分离率依次为猪肉75.3%,羊肉67.8%,牛肉52.2%和凉拌菜46.4%。2.本研究建立一种致病性大肠杆菌的多重PCR检测方法,并检测所分离的食源性大肠杆菌中致病性大肠杆菌的存在情况,共检出2株肠聚集性大肠杆菌EAEC（aggR阳性）;4株肠致病性大肠杆菌EPEC（eaeA阳性）;1株肠产志贺样毒素大肠杆菌（stx1与stx2阳性）;1株未能分型致病性大肠杆菌（st及stx2阳性）;未检测出侵袭性大肠杆菌（EIEC）。3.以耐药结果为依据,选取140株大肠杆菌扩增其1类整合子。结果显示共有33株大肠杆菌含有1类整合子,携带率为（23.6%）,共有两种1类整合子,大小约1.5kb和约1kb。测序结果用Blast在Genebank中对比分析耐药基因盒,结果显示1.5kb整合子携带的耐药基因有dfrA1,aadA2; 1kb整合子携带的耐药基因盒有aadA22。4.以实验室分离大肠杆菌菌株E11-83（耐链霉素）和E6-203（耐萘啶酮酸）做为供体及受体菌,研究供体及受体菌的浓度比、接合培养介质、氧气量、抗生素诱导、接合时间、温度等因素对接合率的影响。结果发现,供体与受体菌比例为1:8时,接合率最高为2.4×10-4;有氧条件下膜接合率最高为2.5×10-4;添加低浓度阿莫西林对于大肠杆菌的接合率影响较小。培养16h接合率达到最高为3.5×10-4;接合温度为27℃产生接合率最高为3.1×10-4。本研究发现,陕西零售肉及凉拌菜中大肠杆菌耐药已经相当严重,并存在被致病性大肠杆菌污染情况;携带1类整合子的菌株几乎全部表现为多重耐药;耐药性很容易通过接合在大肠杆菌之间传递。本研究为指导临床用药和控制食源性致病菌的耐药传播提供了科学依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 食源性疾病已成为重要的公共卫生问题
• 1.2 细菌耐药性的产生与现状及其对人类健康带来严重挑战
• 1.3 大肠杆菌的生物学特性
• 1.4 致病性大肠杆菌分类及其致病性
• 1.5 耐药基因在细菌间的转移
• 1.6 整合子-耐药基因盒系统与细菌耐药性
• 1.7 研究意义及方法
• 第二章 大肠杆菌的分离与耐药谱测定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 大肠杆菌分离情况
• 2.2.2 大肠杆菌对15 种常见抗生素的药敏性
• 2.2.3 大肠杆菌的多重耐药性
• 2.2.4 大肠杆菌的多重耐药谱
• 2.3 结论与讨论
• 2.4 小结
• 第三章 致病性大肠杆菌检测
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 多重 PCR 电泳结果
• 3.2.2 致病性大肠杆菌检测结果
• 3.2.3 致病性大肠杆菌耐药谱
• 3.3 结论与讨论
• 3.4 小结
• 第四章 大肠杆菌整合子检测
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 1 类整合子检测结果
• 4.2.2 1 类整合子测序结果
• 4.3 结论与讨论
• 4.3.1 1 类整合子检测率结果讨论
• 4.3.2 1 类整合子携带基因盒结果讨论
• 4.4 小结
• 第五章 大肠杆菌耐药性水平传递研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 不同供受体比例对接合的影响
• 5.2.2 不同培养介质及微氧和有氧对接合的影响
• 5.2.3 抗生素胁迫对接合的影响
• 5.2.4 培养时间对接合的影响
• 5.2.5 温度对接合的影响
• 5.3 结论与讨论
• 5.4 小结
• 第六章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介