论文摘要
研究背景甲状腺功能亢进症（简称：甲亢）系指由多种病因导致体内甲状腺素分泌过多,引起以神经、循环、消化等系统兴奋性增高和代谢亢进为主要表现的一组疾病的总称,是一种临床综合征,常见症状为多食易饥、体重减轻、心动过速、乏力、急躁、易激动等。甲亢病因较为复杂,其确切发病机制尚未明确,临床上以弥漫性毒性甲状腺肿最常见,约占所有甲亢患者的85%,其次为结节性甲状腺肿伴甲亢和亚急性甲状腺炎伴甲亢。中医将本病归于“瘿、瘿气”范畴。一般认为其发病原因首先在于患者素体阴亏,肾阴不足,阴虚阳亢,加上情志失调,变生阴虚火旺、气阴两虚、痰湿阻滞等病机,其病位涉及肝、肾、心、脾、肺,而以肝肾为主。现代医学目前多采用抗甲状腺药物治疗及放射性碘和手术等措施。抗甲状腺药物的作用是抑制甲状腺合成甲状腺激素,后两种是通过破坏甲状腺组织减少甲状腺激素的产生达到治疗目的。然而三者对甲亢均不能进行病因治疗,且容易发生粒细胞减少、药疹、肝损害等不良反应。近十年来中医药治疗甲亢有了可喜的进展,新的治疗方剂的出现和治疗方法的不断完善,使其在改善甲亢症状、调节人体免疫机制等方面显示出独特优势,使临床疗效得到了提高,且毒副反应小,降低了复发率,而且在一定程度上揭示了中药治疗甲亢的作用机理,逐渐受到中外研究者的重视。愈来愈多的研究表明：中药将在未来防治甲亢中发挥肯定作用。因宁片为广州南方医院临床经验方,它是以中医理论为依据,借助现代科技,从药理学、病理学等多学科角度入手,筛选了上百种中草药,最终由黄芪、昆明山海棠、鳖甲、当归、生地、甘草等九味中药科学配伍研制而成,诸药相和,共奏养阴软坚,解毒散结之功。经临床观察表明：因宁片对阴虚型、痰湿型、血瘀型甲亢均具有较好的临床疗效,可以有效地消除甲亢症状,快速修复机体各个系统的正常功能,全面提高自身的免疫功能,达到标本兼治的目的。而且初步预试验显示：因宁片对肝脏具有保护作用,避免了甲亢本身以及抗甲状腺药物引起的肝损害,填补了抗甲亢药物防肝损害治疗的用药空白。本研究课题将结合药剂学、天然药物化学、药理学、内分泌学、核医学、卫生统计学等学科的研究方法和技术,运用正交法对因宁片的制剂工艺进行优化,并且将考察因宁片对甲亢阴虚小鼠的药理作用。最终为因宁片的新药研发及临床甲亢的治疗提供实验依据。目的采用正交试验设计法对因宁片的制剂工艺进行优化,优选出因宁片的最佳制剂工艺条件,为因宁片的新药研发提供试验依据；利用甲状腺素和利血平诱导建立小鼠甲亢阴虚征模型；观察因宁片对甲亢阴虚小鼠的药理作用,对各组小鼠的外观行为,摄食量及饮水量,体重,甲状腺脏器系数,肝脏脏器系数,cAMP、cGMP水平,常压耐缺氧时间,负重游泳时间,游泳后肝糖原含量变化情况进行计算检测和分析,为因宁片的新药研发及临床甲亢的治疗提供试验依据。方法1正交法优选因宁片的制剂工艺的研究首先以浸膏得率为指标进行预实验对提取次数进行考察,根据预实验结果选取加水量、煎煮时间、浸泡时间三个因素,每个因素选取3个水平,分别为：加水量（12、10、8倍）；煎煮时间（3,3,3、3,2,2、3,2,1小时）；浸泡时间（1.5、1.0、0.5小时）,以浸膏得率、黄芪甲苷含量、表-儿茶素含量为指标,采用正交试验法对因宁片的制剂工艺进行优化,通过直观分析及方差分析优选出最佳工艺,并对最优制剂工艺进行验证试验。黄芪甲苷及表-儿茶素的含量测定均采用高效液相色谱法。2甲状腺素和利血平诱导的小鼠甲亢阴虚证模型的制备昆明小鼠48只,♀♂各半,随机分为4组,每组12只,第1组为空白对照组,第2-4组为甲状腺素和利血平混悬液低、中、高剂量组。空白对照组给予等体积的生理盐水,其余各组分别ig给予75mg/kg甲状腺素和0.5mg/kg利血平、150mg/kg甲状腺素和1mg/kg利血平、300mg/kg甲状腺素和2mg/kg利血平生理盐水混悬液。1次/d,连续给药7d。观察造模后各组小鼠的外观、行为、体重的变化,用放射免疫法和免疫放射法检测各组小鼠血清T3、T4、FT3、FT4、TSH值,摘取小鼠甲状腺、肝脏组织称量,计算脏器系数。3因宁片对甲亢阴虚小鼠的药理作用研究将昆明种小鼠按体质量随机分为6组,即空白对照组,模型对照组,阳性对照组（甲亢灵组）,因宁片低、中、高剂量组,每组10只,♀♂各半。除对照组给予等体积的生理盐水外,其余组每日灌胃300mg/kg甲状腺素混悬液及2mg/kg利血平,连续7d进行甲亢阴虚型小鼠造模。第8d起每日给药一次进行治疗,对照组及模型组给予等体积生理盐水,甲亢灵组1.2g/kg甲亢灵片混悬液,因宁片低、中、高剂量组分别给药0.6g/kg、1.2g/kg、1.8g/kg的因宁片混悬液（相当于临床用药剂量的10倍、20倍、30倍）,连续30d。观察各组小鼠外观行为,摄食量及饮水量等一般情况,并于造模前,造模7d,治疗30d后称量各组小鼠体重。测定各组小鼠的甲状腺脏器系数,肝脏脏器系数,cAMP、cGMP水平,常压耐缺氧时间,负重游泳时间,游泳后肝糖原含量变化情况。结果1正交法优选因宁片的制剂工艺的研究预实验结果表明：第3次提取的浸膏得率大于3次总量的10%,且第三次提取后除氨基酸未检测出以外,皂苷类及鞣质类仍能检测出,结果较明显。因此,确定提取次数为3次。正交试验结果表明：A因素选择A1水平即12倍加水量；B因素对浸膏得率影响不显著,对黄芪甲苷含量和表-儿茶素含量影响显著,考虑到后两个评价指标更为重要,所以B因素选择B2水平或B3水平即三次的煎煮时间分别为3,2,2h和3,2,1h；C因素对浸膏得率影响不显著,对黄芪甲苷含量和表-儿茶素的含量虽然有显著影响,但都不及B因素重要,所以考虑生产成本及生产时间,C因素选择C2水平即浸泡时间为1.0h。仅需对B2和B3进行进一步的验证。因此,根据正交试验结果优选出的因宁片制剂工艺的最优条件为A1B3C1或A1B2C2,即提取时加水量为12倍,煎煮时间分别为3,2,2h和3,2,1h,浸泡时间为1.0h。经过验证试验及重复试验,本试验研究最终确定了因宁片制剂工艺的最优条件为：A1B2C2,即提取时加水量为药材的12倍,提取时间分别为3,2,2h,浸泡时间为1.0h,且此工艺条件合理稳定可行。2甲状腺素和利血平诱导的小鼠甲亢阴虚证模型的制备本研究结果表明：通过灌服甲状腺素和利血平混悬液的方法进行造模,实验结束后与空白对照组比较,第4组即甲状腺素和利血平混悬液高剂量组小鼠T3、T4、FT3、FT4值显著升高（P<0.05）,且TSH值显著降低（P<0.05）,体重显著减轻（P<0.05）,甲状腺、肝脏脏器系数均显著增大（P<0.05）,具有中医阴虚证的临床表现如躁动不安、皮毛光泽度差、进食量减少、饮水量减少等,说明本实验制备的阴虚症动物模型是成功的,其剂量选择为甲状腺素300mg/kg和2mg/kg利血平为宜。3因宁片对甲亢阴虚小鼠的药理作用研究本研究结果表明：通过灌服甲状腺素和利血平混悬液的方法进行造模,然后对甲亢阴虚小鼠进行给药30d治疗后,与甲亢模型组比较,因宁片低、中、高组小鼠体重、cGMP水平、常压耐缺氧时间、负重游泳时间、游泳后肝糖原含量与模型组比较均显著增加（P<0.05）,甲状腺脏器系数、肝脏脏器系数、cAMP水平及cAMP/cGMP比值则显著下降（P<0.05）。结论1通过正交试验设计优选出的因宁片制剂工艺A1B2C2（即提取时加水量为药材的12倍,提取时间分别为3,2,2h,浸泡时间为1.0h）合理,稳定,可行,且在保证药品质量的前提下,节约了能源,降低了生产成本,提高了经济效益。2通过对小鼠各项指标的测定,确定灌服甲状腺素300mg/kg和2mg/kg利血平混悬液,连续ig给药7d后,小鼠甲亢阴虚征模型制备成功。3通过对小鼠各项指标的测定,证明因宁片能明显改善甲亢小鼠的阴虚症状,提高了甲亢阴虚小鼠的耐缺氧及抗疲劳能力,有较好的滋阴作用。
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相关论文文献
- [1].因宁片减轻T_3诱导BRL肝细胞损害的体外实验研究[J]. 中药材 2012(01)
- [2].因宁片对甲状腺片诱导的甲亢阴虚型大鼠的影响研究[J]. 医药导报 2009(11)
- [3].因宁片对甲亢大鼠肝细胞凋亡调节蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响[J]. 中国药业 2011(11)