论文摘要
新城疫是由新城疫病毒引起禽类的急性、高度接触性、烈性传染病，对养禽业危害极大。我国对鸡新城疫的主要防制措施是用活疫苗和LaSota油苗进行免疫，产生ND抗体而抵御鸡新城疫的发生。据资料表明，现在许多地方都有非典型新城疫发生，这除了一部分是由于免疫方法、免疫程序不够科学合理外，其他多数可能是由于疫苗毒株与当地流行毒株的基因差异导致免疫保护不够充分而引起的。本研究就本地流行毒株进行分离鉴定和油乳剂灭活疫苗的研制工作。本研究从广西玉林市某养鸡场分离到四株新城疫毒株，通过对这四株分离株进行F基因克隆和序列分析、动物致病性试验、分子生物学特性鉴定，测定YL03的ELD50为10-8.5／0.1mL；MDT为42h；ICPI为1.89；对鸡、鸭、鹅等家禽和部分野禽有100％的致死率；YL02、YL03、YL04的F基因裂解位点氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117，与新城疫强毒株F基因裂解位点氨基酸序列112R／K-R-Q-K／R-R-F117的特征相符；且这三个分离株101位为K和121位为Ⅴ这两个特征性氨基酸，综合以上数据表明这三个分离株为新城疫F基因Ⅶ型强毒株，这说明本地已有Ⅶ型新城疫强毒株的流行。通过F基因核苷酸和氨基酸序列分析，YL02、YL03、YL04株F基因核苷酸、氨基酸序列与标淮毒株F48E9、LaSota疫苗株的同源性都较低，这个结果提示我们应该针对当地流行ND毒株进行更多的研究，找出防制非典型新城疫的措施。以分离到的YL03株作为种毒进行疫苗的研制，获得一个油乳剂灭活疫苗。经检验该疫苗安全、稳定性较好。以该疫苗对本地三黄鸡、番鸭进行免疫接种，接种3周后分别以YL03毒株和F48E9株攻毒试验，免疫动物获得100％的保护，而对照组动物则100％死亡，免疫动物可抵御不同类型强毒株的侵袭；以四种不同的免疫方法和程序对鸡进行免疫对比试验表明，YL03株油乳剂灭活苗与新城疫Ⅳ系弱毒苗联合使用，使鸡获得充分的粘膜局部免疫和机体抗体保护作用，相对于常规疫苗免疫可抵御新城疫强毒的侵袭。经在本地田间试验农明YL03株油乳剂灭活苗是安全、有效的，可以为我国研制ND新疫苗提供一些材料和经验。
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摘要ABSTRACT综述部分文献综述1 新城疫及检验方法的研究进展1.1 病原学研究1.2 流行病学研究1.3 常规诊断检测方法的研究1.4 分子生物学诊断技术的研究2 NDV的分子生物学研究现况2.1 NDV的基因组结构2.2 NDV的结构蛋白和功能3 ND的免疫机理及防制3.1 ND的免疫机理3.2 ND的防制4 基因工程疫苗的研究进展5 我国ND的现状及存在的问题5.1 我国ND流行的新特点5.2 非典型ND发生的原因分析实验部分第一章 四株NDV的F基因克隆与序列分析1 材料与方法1.1 NDV毒株1.2 工具酶1.3 主要仪器1.4 SPF鸡胚1.5 空斑纯化试验1.6 纯化病毒的扩增1.7 病毒基因组RNA提取1.8 NDVF基因的RT-PCR扩增1.9 琼脂糖凝胶电泳分析1.10 F基因核苷酸序列分析2 结果2.1 病毒扩增2.2 空斑试验2.3 RT-PCR反应结果2.4 分离株F基因序列分析2.5 分离株与其他毒株F基因核苷酸、氨基酸序列同源性比较3 讨论第二章 YL03株的生物学特性鉴定与致病性试验1 材料与方法1.1 ND病毒1.2 试验动物1.3 阿氏液1.4 康复鸡血清1.5 鸡胚接种1.6 血凝和血凝抑制试验1.7 鸡胚平均致死亡时间的测定1.8 一日龄雏鸡脑内接种致病指数的测定50的测定'>1.9 YL01株的ELD50的测定1.10 动物致病性试验1.11 回归试验1.12 高母源抗体雏鸡的攻毒试验2 结果2.1 病毒的分离2.2 鸡胚平均致死亡时间的测定2.3 一日龄雏鸡脑内接种致病指数50的测定'>2.4 ELD50的测定2.5 动物致病性试验2.6 回归试验2.7 高母源抗体雏鸡的攻毒试验3 讨论第三章 YL03株油乳剂灭活苗的制备与应用1 试验材料1.1 种毒1.2 试验动物1.3 疫苗1.4 病毒抗原的制备1.5 疫苗的制备2 试验方法2.1 疫苗检验2.2 免疫保护试验2.3 交叉免疫保护试验2.4 免疫对比试验2.5 YL03油苗对经免青年鸡和种鸡的免疫试验3 结果3.1 疫苗检验3.2 免疫保护试验3.3 交叉免疫保护试验3.4 免疫程序对比试验3.5 YL03油苗对经免青年鸡和种鸡的免疫试验4 讨论结论致谢参考文献
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