论文摘要
白细胞介素-1β（IL-1β）是一种在动物机体的炎症发生中起重要调节作用的细胞因子,主要由单核/巨噬细胞合成和分泌,通过诱导淋巴细胞的分化和增值提高机体细胞免疫应答。IL-1β还可以提高疫苗的免疫效果,作为潜在的免疫佐剂。将IL-1β作为疫苗佐剂已经在绵羊、猪、牛和鱼等动物中广泛研究或使用。白细胞介素-6（IL-6）是一种多功效的细胞因子,其在调节免疫应答、急性期反应、造血功能以及炎症反应中发挥着重要的作用。机体许多细胞都可以合成和分泌IL-6,并且作用于B细胞、T细胞、肝实质细胞、骨髓造血干细胞以及中枢神经系统中的某些细胞。IL-6和IL-1、TNF-α共同作用是机体急性期反应发生的强有力的诱发因子。本研究根据山羊IL-1β（GenBank登录号D63351）和山羊IL-6（GenBank登录号D86569）,设计并合成特异性引物,分别以本实验室保存的山羊IL-1βcDNA和IL-6 cDNA为模板,扩增了山羊IL-1β和IL-6的全序列和成熟肽序列基因。结果显示,山羊IL-1β开放阅读框（0RF）为801bp,与GenBank中登录的山羊IL-1β基因序列（登录号D63351）相似性为99.4%,编码267个氨基酸。山羊IL-6开放阅读框（ORF）为627bp,切除信号肽后核苷酸片段大小为552bp,与GenBank中登录的山羊IL-6基因序列（登录号D86569）相似性为99.6%,编码184个氨基酸。应用DNA重组技术,将克隆成功的山羊GIL-1β基因和mGIL-6成熟蛋白基因分别与原核表达载体pET-28a（+）和pET-32a（+）连接,构建了pET-28a（+）-GIL-1β和pET-32a（+）-mGIL-6原核表达载体。将其转化至E.coli BL21（DE3）宿主菌中诱导表达,表达产物超声裂解后经SDS-PAGE分析,GIL-1β融合蛋白大小为33.07KDa,mGIL-6融合蛋白大小为42.24KDa。GIL-1β融合蛋白主要以包涵体形式存在,mGIL-6融合蛋白则以上清和包涵体两种形式存在。用His镍柱将其成功纯化后,并对溶解在尿素中的GIL-1β包涵体采用透析复性法将其复性。为了检测GIL-1β融合蛋白和mGIL-6融合蛋白的生物学活性,本实验通过GIL-1β融合蛋白协同伴刀豆蛋白A（ConA）促C57BL品系小鼠胸腺细胞增值实验检测了GIL-1β融合蛋白的活性,结果显示重组山羊IL-1β具有明显促C57BL品系小鼠胸腺细胞增值效应。通过mGIL-6融合蛋白对伴刀豆蛋白A（ConA）诱导活化的山羊外周血淋巴细胞的增值实验检测了mGIL-6融合蛋白的活性,结果显示重组山羊IL-6具有明显促山羊外周血淋巴细胞增值效应。
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