结核分枝杆菌硫代硫酸硫转移酶cysA2-cysA3和sseB基因克隆表达及生理功能研究

论文摘要

结核病，是由结核分枝杆菌引起的疾病，引起全世界每年有300万人死亡。硫在结核杆菌中扮演重要角色。硫代硫酸硫转移酶在细胞硫转运中是一个限速酶，催化转移硫。我们用基因工程方法在大肠杆菌中构建了结核菌硫代硫酸硫转移酶两基因，用硝普钠处理以检测功能。序列比对得到结核菌硫代硫酸硫转移酶中两个保守活性位点(Arg，Cys)，实验中发现加入硝普钠后细胞生存依赖与该酶的表达及硫代硫酸钠有关。探讨一种新的以硝普钠参与的硫代硫酸硫转移酶酶活检测方法和机制。结果预示硫代硫酸硫转移酶在结核菌氰化物解毒和结核铁硫簇形成中可能起作用。而且作为治疗心血管疾病的临床药物硝普钠可能有更广阔的运用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.生物体中的硫
• 2.硫代硫酸硫转移酶
• 第二章 实验材料和方法
• 1.试剂和材料
• 2.方法
• 第三章 实验结果
• 1.TST编码序列扩增
• 2.序列及同源性预测
• 3.重组菌株的构建及序列鉴定
• 4.TST蛋白的鉴定
• 5.蛋白表达可溶性及优化
• 6.TST蛋白纯品获得
• 7.原子吸收光谱测重组菌铁含量
• 8.酶活探讨
• 9.依赖TST的细胞耐受
• 第四章 讨论
• 1.序列分析
• 2.酶活探讨
• 3.重组菌在硝普钠下的耐受性
• 4.重组菌铁含量
• 参考文献
• 致谢