黄药子致肝毒性/配伍当归后减毒的亚细胞机制及毒性成分体外代谢研究

论文摘要

黄药子始载于唐代孙思邈的《千金要方·月令》，多用于治疗瘿瘤（甲状腺肿），现代临床上也用于治疗食管癌、肝癌及甲状腺肿瘤等病症，由于黄药子突出的药用价值，使其临床应用增多，在获得可靠的疗效的同时也发现该药对肝脏具有一定的毒性。黄药子的毒性主要表现为能引起肝实质损伤，且损伤的程度和剂量与给药时间有关。文献报道因服用黄药子及其复方引起的药源性肝炎已达50余例，其中3例死亡。当黄药子配伍当归后，可明显减轻其对肝细胞的损害程度，并在一定程度上有增强疗效作用，但机制尚不明确。目的：研究黄药子致肝毒性及配伍当归减毒机制，减轻长期大量服用黄药子引起的严重的药源性肝损伤，使其不良反应更为明晰，也对临床合理、安全用药具有重要的指导意义。方法：本课题组在药理学实验研究的基础上，采用透射电镜、激光共聚焦扫描显微镜等研究手段从亚细胞层面对黄药子肝毒性及配伍当归减毒机制进行探讨；对黄药子及配伍当归后对细胞色素P450混合功能氧化酶亚型1A2、2E1、3A的影响进行研究；通过提取分离药效追踪的方式分离纯化得到其毒性成分-黄独乙素，以HPLC对黄独乙素在肝微粒体中代谢情况进行研究。结果：一结合前期研究基础，进一步深化黄药子致肝毒性血清酶学机制和细胞形态学研究，确定了其致毒机理与氧化应激有关。二以提取分离，药效追踪为指导原则，进行黄药子肝毒性成分的分离制备，结合1H、13C NMR，MS-ESI等现代波谱手段进行结构鉴定。确定了所得成分为二萜内酯类成分-黄独乙素。三观察黄药子及配伍当归对SD雄性大鼠的肝细胞内线粒体膜电离位及细胞内Ca2+含量的影响，黄药子致细胞内游离Ca2+含量增高及配伍后对肝损害进程中的细胞内钙超载有一定的抑制作用。四通过离体肝灌流观察到黄药子对离体肝脏的致毒作用，配伍当归后，对肝毒性有一定改善，说明当归除了通过P-糖蛋白机制外，还通过抗氧化、保护线粒体、平衡细胞内钙离子浓度来起到及抗肝损伤作用。五分析黄药子及配伍当归对SD雄性大鼠肝CYP450酶亚型的影响，探讨黄药子单用及配伍后对肝药酶的反作用。六制备肝微粒体，进行黄独乙素体外代谢研究，孵育60分钟，有四个代谢成分生成，分别为峰1、2、3、4。至180分钟，达到2号代谢成分峰最大生成量，可为在体药动学研究提供理论依据。结论：1．黄药子致肝毒性主要通过生成氧自由基损伤线粒体，造成细胞能量代谢障碍，启动线粒体依赖性细胞质凋亡通路，引起细胞凋亡。2．以体外代谢阐明了黄独乙素在肝微粒体中的代谢规律，为黄独乙素的毒代动力学研究奠定基础。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 一、文献综述
• 1、祖国医学对中药毒性的认识
• 2、中药配伍减毒性研究
• 3、黄药子、当归及其配伍的理论的研究
• 4、中药毒性研究与方法学概述
• 5、肝毒性机制研究进展
• 二、实验研究
• 实验一 黄药子不同极性组分肝毒性比较研究
• 实验二 黄药子肝毒性及配伍当归减毒亚细胞机制研究
• 实验三 以离体肝灌流技术研究黄药子及配伍当归后对肝细胞的致毒及减毒作用
• 实验四 黄药子及配伍当归后对CYP450亚型的影响
• 实验五 黄药子毒性成分制备
• 实验六 黄独乙素的体外代谢
• 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读博士期间发表的论文
• 个人简历