安徽铜陵铜尾矿原生演替过程中的土壤固氮菌研究

安徽铜陵铜尾矿原生演替过程中的土壤固氮菌研究

论文摘要

生物可利用氮的缺乏是原生演替早期生物生长的主要限制因子之一。固氮微生物通过生物固氮作用为这种氮素匾乏的生态系统提供稳定的N来源,提高土壤基质的营养水平,从而促进后期演替物种成功定居,固氮菌在尾矿原生演替进程中扮演重要角色。本文以安徽铜陵已弃置20年铜尾矿的原生演替过程为模式,选择裸地(BT)、藻类结皮(AC)、苔藻混合结皮(AMC)、苔藓结皮(MC)和高等植物覆盖区域(VEG)作为尾矿原生演替的系列样地;选择邻近山上土壤结构好且物种丰富的草本植被区作为演替后期的对照点(CK)。通过末端限制性片段长度多态性(TRFLP)、克隆文库和荧光定量PCR(qPCR)等方法,结合土壤理化特征相关分析,阐明铜尾矿原生演替过程中固氮微生物的群落结构及其丰度变化规律。主要研究结果如下:(1)固氮菌多样性在尾矿演替过程中总体上呈现先升后降的趋势,其中以裸地最低,生物结皮系列最高。这些固氮微生物主要分布在蓝藻门和变形细菌门(主要是α-Proteobacteria),前者主要存在于结皮系列中,而后者在演替各个阶段都有分布。生物结皮是尾矿原生演替过程中的一个重要阶段,而固氮蓝藻是生物结皮系列主要的N素来源。(2)铜尾矿中固氮菌数量丰富。在所研究的样地中,每克土含有的nifH基因拷贝数在5.06×105(BT)和3.47×108(CK)之间,总体来说,随着铜尾矿原生演替的发展,固氮微生物数量呈现逐渐增加的趋势。nifH基因拷贝数和土壤重金属含量负相关(p < 0.05),而与碳氮水平呈显著正相关(p < 0.01),这可能与演替后期生物结皮和高等植物在改善土壤基质和减少环境干扰方面的贡献有关。(3)铜尾矿原生演替过程(BT-BSCs-VEG)是一个土壤基质发展的过程,固氮微生物在演替早期发挥重要作用,主要表现为缓解土壤氮素缺乏的环境胁迫,为后期生物结皮和高等植物的定居提供必需的氮素来源。本研究通过比较铜尾矿原生演替过程中固氮微生物的种类组成及其丰度变化,揭示固氮菌在促进原生演替进程中的作用,对完善尾矿废弃地生态恢复理论和指导尾矿生态修复实践具有重要意义。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 目录
  • 第1章 前言
  • 1.1 固氮微生物概述
  • 1.1.1 生物固氮与固氮微生物
  • 1.1.2 固氮酶与固氮基因
  • 1.1.3 固氮微生物研究中的前沿分子技术
  • 1.2 原生演替的研究进展
  • 1.3 重金属尾矿与生态恢复
  • 1.4 本研究的提出
  • 1.5 技术路线
  • 第2章 材料与方法
  • 2.1 研究样地概况
  • 2.2 样品的采集和保存
  • 2.3 土壤理化性质分析
  • 2.4 生物固氮
  • 2.5 土壤固氮菌群落结构及丰度分析
  • 2.5.1 环境样品DNA 的提取
  • 2.5.2 TRFLP 分析
  • 2.5.3 克隆文库分析
  • 2.5.4 实时荧光定量PCR
  • 2.5.5 统计分析
  • 第3章 结果
  • 3.1 土壤理化特性
  • 3.2 演替过程中固氮微生物多样性变化
  • 3.2.1 nifH 基因的TRFLP 分析
  • 3.2.2 系统发育多样性分析
  • 3.3 演替过程中固氮微生物数量变化
  • 3.3.1 标准曲线制作
  • 3.3.2 溶解曲线和电泳分析
  • 3.3.3 环境样品分析
  • 3.3.4 土壤固氮微生物数量与土壤理化性质的关系
  • 3.3.5 固氮酶活性及其与固氮微生物数量的关系
  • 第4章 讨论与结论
  • 4.1 讨论
  • 4.2 结论
  • 4.3 创新点与不足之处
  • 参考文献
  • 致谢
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