冬虫夏草原生质体育种及液体富Zn、Se、Ge研究

论文摘要

冬虫夏草（Cordyceps sinensis）目前难以规模化人工栽培,主要以野生冬虫夏草为主,过渡的滥采滥收造成资源稀少,生态环境遭到严重破坏,同时也远远不能满足市场需要。而虫草菌丝体中主要功效成分与野生冬虫夏草相当,且人工液体培养虫草菌丝体具有周期短、易控制、成本低、重复性好等优点。因此本课题对冬虫夏草菌丝体进行原生质体制备与再生,优化单酶或复合酶酶解条件,利用原生质体诱变技术,选育多糖高产量冬虫夏草诱变菌株,并以诱变菌株为载体,进行Zn、Se、Ge单元素和三元素富集,优化富集条件,以小白鼠为试材,对谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidsade,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）等抗氧化指标进行初步检测,得到了以下结论:1、冬虫夏草液体培养基最佳组成为:马铃薯20%,葡萄糖2%,酵母粉0.2%,水1000mL,pH6.0。在此条件下,25℃、160r/min振荡培养4d,生物量达到1.72g/100mL。2、研究了不同酶系统、酶浓度、酶解温度、酶解时间、稳渗剂、pH值、培养时间对冬虫夏草原生质体形成的影响。结果表明,在30℃、pH6.0、1.5%溶壁酶条件下,以0.6mol/L氯化钾作为稳渗剂,酶解3h,原生质体产量达到4.35×107个/mL。3、冬虫夏草原生质体适宜再生培养基为:麦芽糖2%,葡萄糖2%,蛋白胨0.2%,酵母粉0.40%,KH2PO4 0.20%,MgSO4·7H2O 0.15%,维生素B1 0.001%,维生素B6 0.001%。再生率达到38.07%。4、冬虫夏草原生质体紫外线辐射至半致死率的照射时间约为20s。根据拮抗反应和生长状况,筛选出100株冬虫夏草原生质体紫外线诱变菌株,以原始出发菌株为对照,从中筛选出10株虫草多糖含量高于原始出发菌株的诱变菌株,编号为024、029、035、036、055、071、078、086、089、098。将10株诱变菌株及原始出发菌株分别连续传代10次,以出发菌株为对照,从中筛选出1株多糖含量更高的诱变菌株,编号为035。5、诱变菌株优化培养基为:马铃薯20%,葡萄糖2%,酵母粉0.4%,KH2PO4 0.2%,MgSO4·7H2O 0.15%,菌丝体生物量达到1.260g/100mL。最佳发酵条件为:pH值6.5、温度25℃、接种量5%、转速120r/min。6、冬虫夏草诱变菌株能够有效地对Zn、Se、Ge进行富集和转化,而且在较低浓度时能够促进菌丝体的生长。培养基中适宜的Zn、Se、Ge添加浓度分别为150μg/mL、60μg/mL、

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述与立题思路
• 1 冬虫夏草研究现状
• 1.1 虫草无性型的鉴定
• 1.2 冬虫夏草的化学成分
• 1.3 液体深层发酵
• 1.4 药理作用
• 2 食用菌育种现状
• 2.1 选择育种
• 2.2 诱变育种
• 2.3 杂交育种
• 2.4 原生质体融合
• 2.5 分子生物学技术
• 3 原生质体育种技术
• 3.1 食用菌原生质体诱变育种技术
• 3.2 食用菌原生质体诱变系统
• 4 微量元素富集与转化
• 4.1 人体补充微量元素的重要性
• 4.2 微量元素与代谢
• 4.3 食用菌富集微量元素的机理
• 4.4 食用菌作为微量元素载体的优点
• 4.5 食用菌对微量元素的富集研究
• 5 富锌、硒、锗冬虫夏草抗氧化能力初步研究
• 5.1 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）
• 5.2 超氧化物歧化酶（SOD）
• 5.3 丙二醛（MDA）
• 6 资料分析
• 7 立题思路与研究内容
• 7.1 立题思路
• 7.2 研究内容与目的
• 第二章 冬虫夏草原生质体形成与再生
• 1 材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 原生质体制备
• 2.2 再生培养基的选择
• 3 讨论
• 4 结论
• 第三章 原生质体紫外线诱变及诱变菌株筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 冬虫夏草原生质体诱变效应曲线及紫外线诱变剂量的选择
• 2.2 诱变菌株和出发菌株多糖含量测定
• 2.3 诱变菌株的遗传稳定性分析
• 3 讨论
• 4 结论
• 第四章 诱变菌株液体富Zn、Se、Ge 研究
• 1 材料与方法
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 1.4 主要试剂
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 诱变菌株摇瓶发酵培养基优化
• 2.2 诱变菌株摇瓶发酵条件实验
• 2.3 单元素富集实验
• 2.4 三元素同时富集实验
• 2.5 诱变菌株虫草多糖（CP）的初步分离纯化及性质研究
• 3 讨论
• 3.1 培养基优化
• 3.2 冬虫夏草对Zn 的富集
• 3.3 冬虫夏草对Se 的富集
• 3.4 冬虫夏草对Ge 的富集
• 3.5 三元素同时富集
• 3.6 冬虫夏草多糖的测定
• 3.7 虫草多糖的分离纯化及其性质
• 4 结论
• 第五章 富锌、硒、锗冬虫夏草抗氧化能力初步研究
• 1 材料与方法
• 1.1 菌液制备
• 1.2 动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）检测
• 2.2 小鼠全血超氧化物歧化酶（SOD）检测
• 2.3 小鼠全血丙二醛（MDA）含量检测
• 3 讨论
• 4 结论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 在读博士期间主要工作成绩