鸡奇异变形杆菌和沙门菌16S rRNA甲基化酶基因的检测及扩散机制

论文摘要

质粒介导的16S rRNA甲基化酶是近年来新发现的一种耐药决定因子,可导致革兰氏阴性细菌对4,6-二取代基-脱氧链霉胺类氨基糖苷类药物（如庆大霉素、阿米卡星等）高水平耐药。因此,深入了解16S rRNA甲基化酶基因在规模化鸡场肠杆菌科细菌的流行状况及扩散机制,在兽医临床抗感染治疗领域上具有重要的实际意义。本研究自2009年5月-2010年11月从河南省4个规模化养鸡场采集样品391份（包括肛门拭子等）。经细菌分离、培养、API细菌鉴定系统和PCR鉴定,共分离奇异变形杆菌20株,沙门菌21株。首先,对这些菌株进行常用抗菌药物的药敏试验。然后,在药敏试验的基础上,采用PCR反应对这些菌株进行16S rRNA甲基化酶基因的检测,初步了解16S rRNA甲基化酶基因在这些菌株中的流行情况,并同时检测了16S rRNA甲基化酶阳性菌株携带ESBLs基因（TEM,SHV,CTX-M）和质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药基因（qnr、qepA和aac（6）-ib）的情况。最后,采用细菌质粒接合试验（以大肠杆菌J53和EC600为受体菌）、电转化试验（以DH10B为受体菌）、脉冲场凝胶电泳试验等,探索研究这些耐药菌株16S rRNA甲基化酶基因的水平和/或垂直扩散机制。结果表明,在分离的20株奇异变形杆菌中,对常用的7种药物均呈现多重耐药,对氨基糖苷类药物阿米卡星高水平耐药的菌株高达100%,经16S rRNA甲基化酶基因检测,均为rmtB基因。在分离的21株沙门菌中,对常用的7种抗菌药物大部分敏感,仅有1株对阿米卡星高度耐药,检测率为4.76%,经16S rRNA甲基化酶基因检测,为armA基因。20株rmtB阳性菌株大多携带CTX-M-2和CTX-M-9组超广谱β-内酰胺酶,其携带率分别为90%和35%。armA阳性菌株还同时携带TEM-1型、CTX-M-2组和CTX-M-9组超广谱β-内酰胺酶基因和质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因qnrS、qnrB和aac（6’）-Ib-cr。对奇异变形杆菌进行多次接合试验和电转化试验均未成功。初步提示,垂直克隆传播,而不是水平传播在其16S rRNA甲基化酶耐药基因扩散中发挥重要作用。脉冲场凝胶电泳的试验结果进一步证实了这种情况,提示本次分离的奇异变形杆菌不同菌株间的亲缘关系密切相关,可能来源于一个共同祖先。沙门菌的多次接合也未成功,其原因有待于进一步证实,但电转化试验成功地获得了电转化菌株。初步表明,其16S rRNA甲基化酶耐药基因armA位于质粒上,可导致其水平扩散。该质粒还同时携带TEM-1型、CTX-M-2组超广谱β-内酰胺酶基因以及质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因qnrB和aac（6’）-Ib-cr。综上所述,本研究首次进行了动物源奇异变形杆菌和沙门菌16S rRNA甲基化酶基因的流行病学检测,并在此基础上对其扩散机制进行了探索。首次分别在动物源奇异变形杆菌和沙门菌上分别检测到16S rRNA甲基化酶基因rmtB和armA。初步证实,奇异变形杆菌16S rRNA甲基化酶基因rmtB的扩散机制以垂直克隆扩散为主。而沙门菌16S rRNA甲基化酶基因armA位于质粒上,以水平扩散为主。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 文献综述
• 1.1 杀菌机制概述
• 1.2 传统主要耐药机制
• 1.3 氨基糖苷类耐药新机制
• 1.4 16S rRNA 甲基化酶基因临床重要性
• 1.5 小结
• 引言
• 试验一：鸡奇异变形杆菌和沙门菌的分离鉴定及药物敏感性检测
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论和分析
• 5 小结
• 试验二 鸡奇异变形杆菌和沙门菌16S rRNA 甲基化酶的检测
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 分析与讨论
• 5 小结
• 试验三 鸡源奇异变形杆菌和沙门菌16S rRNA 甲基化酶基因的扩散机制
• 1 前言
• 2 材料和方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• Abstract