论文摘要
【目的】在氯化钴化学诱导缺氧微环境条件下，观察人结直肠癌细胞株SW-480细胞体外增殖活力和侵袭能力改变，探讨缺氧对结直肠癌肿瘤生物学行为的影响；检测缺氧诱导因子-1α和上皮型钙粘蛋白的分子表达，分析二者在缺氧反应中的作用和相互关系，为大肠癌防治提供理论依据。【方法】采用氯化钴诱导体外模拟缺氧环境，并以不同浓度的氯化钴培养液代表不同的缺氧程度，将体外培养增殖的SW480细胞按培养条件分为常氧组、低氧组和缺氧组，MTT法检查细胞增殖活力，Transwell法检测细胞侵袭迁移能力，免疫细胞化学法观察HIF-1α和E-cadherin细胞表达部位，RT-PCR法及Western-blotting法分别检测HIF-1α和E-cadherin的mRNA、蛋白的表达水平。【结果】1、MTT检测结果显示随氯化钴浓度增加，SW480细胞的增殖活力逐渐降低；与常氧组相比，低氧组和缺氧组均降低，差异有统计学意义（P<0.01）；低氧组和缺氧组之间相比差异有统计学意义（P<0.01）；2、Transwell体外侵袭实验结果显示，低氧组和缺氧组细胞穿膜数目较常氧培养组增加，提示SW480细胞转移能力随缺氧程度的增加而逐渐增加；3、细胞爬片免疫化学染色，高倍镜下观察，各组细胞HIF-1α蛋白表达定位细胞核和细胞质，E-cadherin蛋白表达在细胞膜和细胞质，表达部位均未因培养条件不同而变化，但HIF-1α的表达强度随缺氧程度增加而增加，E-cadherin的表达强度则随缺氧程度增加而降低；4、RT-PCR及Western-blotting检测显示，随缺氧程度增加HIF-1αmRNA及蛋白在SW480细胞中表达逐渐增加，而E-cadherinmRNA及蛋白表达逐渐降低，两者反向表达呈负相关，且基因与蛋白表达呈现较好的一致性。【结论】1、缺氧微环境可使SW480细胞株体外增殖活性明显降低、侵袭迁移能力显著增强；2、缺氧可以诱导HIF-1α基因和蛋白的高表达，下调E-cadherin基因和蛋白的表达；3、HIF-1α与E-cadherin在结直肠癌细胞中的表达呈现负相关性，且在基因和蛋白表达水平呈现较好的一致性。