论文摘要
钙离子(Ca2+)是细胞中非常重要的第二信使,它可以介导信号的传递,在细胞生命活动中具有非常重要的作用。许多生命现象如细胞增殖、分化、凋亡等都与之相关。各种检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的方法与技术也随之发展起来。比率荧光测量方法就是目前最先进的[Ca2+]i检测方法之一。本文首先介绍了各种检测[Ca2+]i的方法与技术,列举了比率荧光检测系统的优点以及需要改善的地方,并就此提出了本文的研究目的与意义。在本论文中,主要做了以下工作:1、对待测细胞Hepa1-6(小鼠肝癌细胞)的荧光探针(Fura-2/AM)的标记时间和标记浓度进行了参数筛选。通过实验,比较不同的标记效果,发现5μmol/L的标记浓度和30min的标记时间为实验系统中Fura-2/AM的最佳标记参数。2、对计算公式[Ca2+]=β·Kd·(R-Rmin)/(Rmax-R)中的两个定标参数Rmax与Rmin进行了体内校正,并对可能影响到这两个参数的因素做了相应分析,使测定过程中的定标更加精确,测定结果更加接近生物体的实际水平。最后综合分析了在不同细胞密度和不同标记浓度下测得的Rmax与Rmin,确定(?)=1.920±0.376,(?)=0.480±0.041。3、应用改善后的实验系统检测并分析了激动剂KCl对非兴奋细胞的[Ca2+]i的影响。发现10mmol/L KCl即可引起Hepa1-6细胞的[Ca2+]i上升;当KCl浓度上升至30mmol/L和50mmol/L时,所引发的[Ca2+]i变化同10mmol/LKCl的作用没有显著差异。
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标签:比率荧光系统论文; 细胞内钙离子浓度论文;