基于表观遗传学探讨补肾中药改善IVF治疗结局的机制研究

论文摘要

目的:从表观遗传学角度探讨补肾中药改善体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者治疗结局的机制。方法:临床研究:将66例行IVF-ET治疗的肾阴虚证不孕患者按照随机数字表法分为治疗组33例（二至天癸颗粒联合促性腺激素（Gn）,33个周期）和对照组33例（单用Gn,33个周期）。治疗组在IVF前3个月卵泡期服用二至天癸颗粒,对照组不服药,两组均在IVF前一个月经周期的黄体中期获取子宫内膜行DNMT1检测。观察两组患者黄体中期子宫内膜DNMT1表达,肾虚证候积分变化情况,Gn用量及用药天数,子宫内膜厚度及分型,子宫动脉、子宫内膜PI和RI,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率及临床妊娠率。实验研究:将105只8-9周龄、健康昆明种雌性小鼠按照随机数字表法分为空白对照组、肾阴虚模型组及肾阴虚治疗组,每组各35只。造模成功后,进行超排卵,每组30只小鼠取卵行卵细胞印迹基因Snrpn和Pegl/Mest甲基化测定,另5只雌雄合笼后取受精卵,观察卵裂率、成胚率。结果:临床研究:治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数低于对照组,单个卵雌激素（E2/卵泡）水平高于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗组着床期子宫内膜DNMT1表达量高于对照组,子宫内膜分型优于对照组,子宫动脉、子宫内膜PI和RI均低于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。实验研究:肾阴虚模型小鼠卵细胞Snrpn和Pegl/Mest基因均发生了不同程度的去甲基化（印迹丢失）,而该去甲基化在肾阴虚治疗组得到部分纠正;各组小鼠受精卵数目、卵裂率及成胚率比较,肾阴虚模型组低于空白对照组,肾阴虚治疗组高于肾阴虚模型组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.在IVF-ET治疗周期,应用补肾中药可明显改善患者肾虚症状,减少Gn用量,提高优质卵率、优质胚胎率,进而改善临床妊娠率。2.补肾中药可提高着床期子宫内膜DNMT1表达量,改善子宫内膜分型,增加子宫动脉及子宫内膜血流灌注,以改善子宫内膜容受性利于胚胎着床,这可能是补肾中药改善IVF结局的机制之一。3.补肾中药可在一定程度上防止肾阴虚模型小鼠卵细胞印迹基因Snrpn和Pegl/Mest的异常去甲基化（印迹丢失）,并提高其受精卵卵裂及成胚能力;推论DNA异常去甲基化可能是肾阴虚不孕的表观遗传学机制之一,补肾中药防止异常去甲基化的发生可能是其治疗不孕症的机制之一。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 文献研究
• 一、补肾在辅助生殖领域的应用
• （一） 补肾在辅助生殖领域的临床应用进展
• （二） 补肾在辅助生殖领域应用的作用机制研究进展
• 二、表观遗传学研究进展
• （一） 表观遗传学的基本概念
• （二） 表观遗传学与人类疾病研究现状
• 三、表观遗传学在中医药领域研究进展
• 四、展望
• 第二部分 临床研究
• 一、研究对象
• （一） 病例来源
• （二） 诊断标准
• （三） 病例选择标准
• （四） IVF-ET 周期前患者准备
• 二、研究方法
• （一） 临床病例分组
• （二） 药物、仪器及试剂
• （三） 方法与步骤
• （四） 观察指标
• （五） 统计学分析
• 三、一般资料
• （一） 两组患者年龄分布比较
• （二） 两组患者病程比较
• （三） 两组患者病史比较
• （四） 两组患者治疗前肾虚证候积分比较
• （五） 两组患者治疗前基础激素水平比较
• 四、研究结果
• （一） 两组患者治疗前后肾虚证候积分变化比较
• （二） 两组患者Gn 用药支数及天数比较
• （三） 两组患者HCG 注射日子宫内膜厚度比较
• （四） 两组患者HCG 注射日子宫内膜分型比较
• （五） 两组患者HCG 注射日子宫动脉及子宫内膜血流PI、RI 比较)
• （六） 两组患者HCG 注射日E2水平及及E2/卵子比较
• （七） 两组患者取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率比较
• （八） 两组患者生化妊娠率及临床妊娠率比较
• （九） 两组患者着床期子宫内膜HE 染色结果比较
• （十） 两组患者子宫内膜DNMT1 比较)
• （十一） 妊娠组与非妊娠组患者子宫内膜DNMT1 比较
• 第三部分 实验研究
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 药物及剂量
• （三） 试剂
• （四） 实验仪器
• 二、实验方法
• （一） 造模方法
• （二） 分组与给药
• （三） 标本获取
• （四） 观察指标
• （五） 统计学分析
• 三、实验结果
• （一） 各组小鼠的一般状态
• （二） 各组小鼠的动情周期观察
• （三） 各组小鼠卵细胞母本印迹基因Snrpn 和Pegl/Mest 的甲基化测定
• （四） 各组小鼠受精卵数目和卵裂、囊胚形成能力的观察
• 第四部分 讨论
• 一、“肾主生殖”与表观遗传学
• （一） “肾主生殖”理论探讨
• （二） DNA 甲基化、DNMT1、基因印迹与生殖
• （三） 从表观遗传学角度认识“肾主生殖”理论
• 二、补肾中药改善IVF 结局的表观遗传学机制
• （一） 补肾之二至天癸颗粒的组方分析
• （二） 补肾中药上调肾阴虚不孕患者着床期子宫内膜DNMT1 表达
• （三） 补肾中药防止肾阴虚模型小鼠卵细胞Snrpn 与Peg1/Mest 基因印迹丢失
• 结论
• 结语
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 查新报告
• 科研课题
• 发表论文
• 详细摘要