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人脐血间质干细胞趋向胃癌种植瘤及其分子机制的实验研究

2020-12-07阅读(750)

人脐血间质干细胞趋向胃癌种植瘤及其分子机制的实验研究

论文摘要

[目的]:研究人脐血间质干细胞对胃癌组织的趋向性并探讨其分子机制。[方法]:（1）动物实验形态学观察人脐血间充质干细胞在裸鼠各组织中的分布:裸鼠腹股沟皮下注射人SGC-7901胃癌细胞建立胃癌种植瘤模型,荧光染料SP-DiI染色人脐血间质干细胞及成纤维细胞,分组注射到对侧腹股沟皮下。10天后处死裸鼠,取出肿瘤、注射部位、肝脏、脾脏和肺脏组织,连续切片分别制成冰冻切片和常规HE染色,荧光显微镜下观察冰冻切片中间质干细胞和成纤维细胞在各器官中的分布。（2）用RT-PCR方法测定人胃癌细胞SGC-7901、MGC80-3、人大肠癌细胞HT-29各种癌细胞中CXCR4 mRNA表达,及人脐血间质干细胞SDF-1 mRNA的表达,探讨CXCR4/SDF-1轴在癌细胞和间质干细胞相互趋化运动中的作用。（3）用荧光定量PCR及免疫组化方法了解CXCR4/SDF-1轴在人胃癌组织和淋巴结转移间的作用:取40例临床手术切除的胃癌组织、胃正常粘膜及胃周肿大淋巴结,分别测定胃癌组织和胃正常粘膜中CXCR4 mRNA及胃周肿大淋巴结中SDF-1 mRNA的表达。[结果]:（1）肿瘤组织内见到大量红色染料标记的人脐血间质干细胞,注射部位、肝脏、脾脏及肺脏中未发现间质干细胞存在,红色荧光物质在肿瘤切片中所占得比例与其它部位切片相比有显著性差异（P＜0.05）;成纤维细胞主要集中于注射部位,其它脏器中未发现存在;（2）荧光定量PCR结果显示胃癌组织中CXCR4-mRNA的表达（1.624±1.380）明显强于胃正常粘膜组（1.072±0.524）（P＜0.05）;有淋巴结转移的胃癌组织CXCR4-mRNA的表达（0.823±0.551）强于无淋巴结转移的胃癌组织（0.392±0.338）（P＜0.05）,有胃癌转移的淋巴结中SDF-1-mRNA的表达（0.5432±0.4907）明显强于无胃癌转移的淋巴结（0.2640±0.2601）（P＜0.05）;有胃癌转移的淋巴结中SDF-1表达和相应胃癌组织中CXCR4的表达量高度相关（r=0.776,p＜0.01）;（3）免疫组化结果显示CXCR4在胃癌中的阳性率为70.0%,正常胃粘膜中的阳性率为27.5%,两组相比有统计学意义（P＜0.05）,CXCR4的表达水平与分化程度、淋巴结转移、Borrmann分型和临床分期密切相关（P＜0.05）,与病人的年龄、性别、肿瘤的大小和肿瘤部位无关（P＞0.05）;SDF-1于有胃癌转移淋巴结中的表达阳性率为75.0%,无胃癌转移的淋巴结中的阳性率为27.5%,两组相比有统计学意义（P＜0.05）。[结论]:（1）人脐血间质干细胞在动物体内能趋向到胃癌组织中,利用此特性可望将其作为载体应用到胃癌的诊断和治疗上;（2）癌细胞表达CXCR4,间质干细胞和淋巴细胞表达SDF-1,符合CXCR4/SDF-1轴中趋化因子SDF-1和其受体CXCR4相互趋化吸引的规律;（3）CXCR4/SDF-1轴在胃癌淋巴结转移过程中发挥了重要作用,CXCR4和SDF-1之间的相互吸引作用导致了胃癌的淋巴结转移,为间质干细胞的趋向运动分子机制提供了佐证。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 引言
  • 第一章 实验材料
  • 1.1 细胞培养试剂及主要仪器
  • 1.1.1 试剂
  • 1.1.2 主要仪器
  • 1.1.3 实验细胞
  • 1.1.4 实验动物
  • 1.2 免疫组织化学分析
  • 1.2.1 标本收集
  • 1.2.2 试剂
  • 1.2.3 仪器设备
  • 1.3 荧光定量 PCR试剂及仪器
  • 1.3.1 试剂
  • 1.3.2 仪器
  • 第二章 实验方法
  • 2.1 细胞培养
  • 2.1.1 细胞培养液配制
  • 2.1.2 体外细胞培养
  • 2.1.3 人脐血间质干细胞和 HFL-I人胚肺成纤维细胞的荧光标记
  • 2.1.4 检测 SGC-7901胃癌细胞株存活率
  • 2.2 动物实验
  • 2.2.1 动物模型的建立
  • 2.2.2 动物分组，观察间质干细胞对瘤组织的趋向运动
  • 2.3 免疫组织化学染色方法
  • 2.3.1 试验步骤
  • 2.3.2 结果判定
  • 2.4 荧光定量 PCR方法
  • 2.4.1 试验标本 RNA的提取
  • 2.4.2 逆转录反应
  • 2.4.3 荧光定量 PCR反应
  • 2.4.4 琼脂糖凝胶电泳反应
  • 2.5 统计学方法
  • 第三章 结果
  • 3.1 细胞培养结果
  • 3.1.1 脐血间质干细胞的形态学观察及表型测定
  • 3.1.2 成纤维细胞的形态学观察
  • 3.2 动物实验结果
  • 3.2.1 镜下观察
  • 3.2.2 统计分析
  • 3.3 免疫组化结果
  • 3.3.1 CXCR4和 SDF-1的表达情况
  • 3.3.2 SOF-1的表达
  • 3.3.3 CXCR4的表达
  • 3.4 荧光定量 PCR结果
  • 3.4.1 CXCR4在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达
  • 3.4.2 SDF-1在胃癌转移阳性和阴性淋巴结中的表达
  • 3.4.3 胃癌组织中 CXCR4的表达和淋巴结中 SDF-1表达的相关性
  • 3.5 琼脂糖电泳结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 附图
  • 综述
  • 参考文献
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 中英文对照
  • 致谢

    • 相关论文文献

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