论文摘要
目的:冠心病（CHD）是临床常见病、多发病,严重威胁着人们的身体健康。因此,如何防治冠心病是国内外医学专家研究的重点课题之一。冠心病的病理基础为动脉粥样硬化（AS）。目前,现代医学对AS发病机理的研究涉及脂质浸润、内皮损伤、血栓形成等方面,近年来尤其对氧化应激、炎症学说探讨较多。越来越多的研究资料表明:冠心病与氧化应激、炎症反应密切相关,两者相互作用、相互影响,共同导致了冠心病的发生与发展。热毒学说是中医学对冠心病病机的一种重要认识。该学说认为热毒瘀于脉络,阻滞心脉气血运行,络脉瘀阻,毒瘀互结,而致胸痹心痛。大量研究证实,热毒与氧化应激、炎症反应密切相关。AS过程中所产生的各种细胞因子、脂质过氧化物均属于中医“内生毒邪”的范畴。目前普遍认为,内皮功能障碍是动脉粥样硬化的关键步骤,它不仅导致AS形成,而且对AS进展及并发症（如血管痉挛、血栓形成）有重要作用。抗AS的关键目标就是保护内皮细胞（EC）免受各种危险因素侵害。而氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作为重要的氧自由基携带者,是内皮损伤的主要机制。鉴于以上,我们根据胸痹热毒学说确立了解毒活血法,并据此法组成解毒活血方,使其含药血清作用于ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤模型,并检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）等指标的变化,从抗氧化、抗炎角度探讨解毒活血法对血管内皮细胞的保护作用,为临床治疗冠心病提供理论和实验依据。方法:1 MTT法观察细胞增殖情况:取对数生长期细胞,消化后以2×105cell/ml的密度接种于96孔培养板,待细胞贴壁生长至约80%后,同步化培养24小时,分为4组:（1）空白对照组:加入20%空白血清+5%新生牛血清培养液（2）病理模型组:加入20%空白血清+100mg/L ox-LDL+5%新生牛血清培养液（3）解毒活血方含药血清低剂量组:加入10%解毒活血方含药血清+10%空白血清+100mg/L ox-LDL+5%新生牛血清培养液（4）解毒活血方含药血清高剂量组:加入20%解毒活血方含药血清+100mg/L ox-LDL+5%新生牛血清培养液。培养24小时后,MTT法观察细胞增殖情况。2培养上清液SOD、MDA、NO、ET-1、TNF-α含量的测定:取对数生长期细胞,消化后以2×105cell/ml的密度接种于24孔培养板,余步骤同上,分组培养24小时后,测定上清液中SOD、MDA、NO、ET-1、TNF-α含量。3免疫组化法测定ICAM-1表达:取对数生长期细胞,消化后以2×104cell/ml的密度接种于预先放有处理过玻片的6孔培养板中,培养24小时后,同步化培养24小时,实验分组及所加液体同上,24小时后,夹出盖玻片,PBS洗涤2次后放入冷丙酮固定10min,取出干燥后细胞面朝上用中性树脂胶封于载玻片上,免疫组化法测定ICAM-1表达。结果:1 MTT法观察细胞增殖情况:解毒活血方含药血清低剂量组（0.78±0.017）、解毒活血方含药血清高剂量组（0.79±0.024）与病理模型组（0.62±0.058）相比,OD值均显著升高（P<0.01）。2培养上清液中超氧化物歧化酶含量:解毒活血方含药血清低剂量组（63.57±1.63）、解毒活血方含药血清高剂量组（67.63±2.95）与病理模型组（58.26±1.34）相比均显著升高（P<0.01）。培养上清液中丙二醛含量:解毒活血方含药血清低剂量组（6.87±1.26）、解毒活血方含药血清高剂量组（6.83±0.46）与病理模型组（10.02±1.66）相比均显著降低（P<0.01）。3培养上清液中一氧化氮含量:解毒活血方含药血清低剂量组（1.86±0.19）与病理模型组（2.34±0.18）相比显著降低（P<0.01）;解毒活血方含药血清高剂量组（2.07±0.21）与病理模型组相比也显著降低（P<0.05）。培养上清液中内皮素-1含量:解毒活血方含药血清低剂量组（57.20±16.12）、解毒活血方含药血清高剂量组（42.97±5.58）与病理模型组（173.84±11.29）相比均显著降低（P<0.01）。4培养上清液中肿瘤坏死因子-α含量:解毒活血方含药血清低剂量组（0.58±0.03）与病理模型组（0.68±0.09）相比显著降低（P<0.05）;解毒活血方含药血清高剂量组（0.43±0.04）与病理模型组相比也显著降低（P<0.01）。5免疫细胞化学方法检测ICAM-1表达:解毒活血方含药血清低剂量组（0.446±0.020）、解毒活血方含药血清高剂量组（0.400±0.043）与病理模型组（0.507±0.064）相比均显著降低（P<0.01）。结论:1通过实验,证实在“解毒活血法”原则指导下选用的方药具有拮抗ox-LDL对血管内皮细胞功能损伤的作用。其机制可能与抗脂质过氧化、抑制或减少炎症因子的释放有关。从而为临床防治冠心病提供了理论和实验依据。2本实验为进一步证实热毒、瘀血是冠心病的主要病机奠定了理论和实验基础。3冠心病是多种因素综合作用的结果,本实验仅从抗炎、抗氧化、保护内皮细胞功能等角度探讨了“解毒活血法”防治CHD的作用机制,是否还有其它方面的作用机制,还需进一步探讨和完善。
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