论文摘要
杂色曲霉素（sterigmatocystin, ST）是杂色曲霉、构巢曲霉等曲霉菌属真菌所产生的一种低分子量代谢产物,广泛存在于自然界,是动物和人类食物中最常见的污染物之一。研究表明ST具有致癌性,可诱导不同的实验动物发生肝癌、肺癌、间皮瘤等肿瘤。ST还具有遗传毒性,可直接损伤细胞DNA、与DNA形成加合物,引起基因突变。本研究室前期实验发现,ST可诱发体外培养人胚胃黏膜细胞发生恶性转化以及抑癌基因P53的突变、过表达;长期灌胃ST可以引起小鼠腺胃黏膜的肠上皮化生和腺上皮不典型增生。细胞周期调控是细胞最重要的生物学过程之一,细胞周期的紊乱可导致细胞的癌变。研究证明ST可以影响靶细胞的细胞周期,谢同欣等研究发现,ST可诱导小鼠胚胎纤维母细胞细胞周期发生G2/M期阻滞。本研究室近期实验也证实,ST可以诱导体外培养胃黏膜上皮细胞GES-1细胞周期阻滞在G2期。但ST诱导细胞G2期阻滞的可能机制还不明确。cyclins是细胞周期进程调控的关键因子,可以激活它们的结合蛋白——细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶（CDKs）,进而靶向作用于各自的下游蛋白。CDK通过调节靶蛋白特定位点的磷酸化,介导细胞周期通过周期调控点。有丝分裂激酶Cdc2 （Cdk1）的激活是G2期调控点的重要的调控因素,它也受到多种因素的调控,例如与CyclinB的周期性结合、可逆的磷酸化作用和胞内移位等。细胞周期蛋白B1 （CyclinB1）是细胞周期G2期的周期蛋白,与其激酶Cdc2形成的复合物是启动有丝分裂的关键因子,可促使细胞周期由G2期进入M期。CyclinB1蛋白表达在G2期达到高峰,与Cdk1形成复合物,进入细胞核,此过程也受到磷酸化作用的调节。蛋白磷酸酶Cdc25C能够使Cdc2去磷酸化,从而促进细胞周期的进程;而磷酸化Cdc25C可丧失酶活性,引起Cdc2磷酸化程度增高,进而导致细胞周期阻滞在G2期。eIF4E是蛋白质合成的重要调节因子,可与其结合蛋白4E-BP1结合,调节细胞周期蛋白D1 （CyclinD1）等蛋白质的合成,eIF4E磷酸化水平增高可增强其促进蛋白质合成的作用。研究表明,eIF4E和4E-BP1也与细胞周期紊乱有关,在多种恶性肿瘤中表达异常。本研究室近期实验发现,ST不仅可以抑制胃黏膜上皮细胞（GES-1）增殖,诱导GES-1细胞周期发生G2期阻滞,还可以影响G2期调控点关键因子——CyclinB1的表达以及Cdc2激酶和Cdc25C磷酸酶的活性,同时,ST还可以抑制eIF4E的翻译起始功能。JNK、ERK和p38是MAPK信号转导通路中最重要的成员。霉菌毒素等环境致癌物、化疗药物等多种体内外因素均可通过影响JNK、ERK和p38信号转导通路诱导靶细胞内相关基因表达,进而引起机体和细胞的相应生物学性状变化。PI3K是Her2家族重要信号转导通路之一,可通过调节下游核因子mTOR进而调控细胞增殖及蛋白质的合成,并且与肿瘤的侵袭、转移、预后及化疗耐受有关。为进一步探讨ST诱导体外培养人胃粘膜上皮细胞周期阻滞的可能机制。本研究在前期实验研究的基础上,观察了不同浓度ST对体外培养永生化胃粘膜上皮细胞GES-1中JNK、ERK、p38和PI3K信号转导通路的影响情况,同时探讨了JNK、ERK和PI3K信号转导通路的激活在ST诱导的GES-1细胞周期G2期阻滞中的作用。本研究论文共分为三个部分:1杂色曲霉素对GES-1细胞中MAPK和PI3K信号转导通路的影响研究目的:探讨一次性给予不同浓度ST对体外培养胃黏膜上皮细胞GES-1中JNK、ERK、p38和PI3K/mTOR信号转导通路的影响情况。方法:取对数生长期GES-1细胞,随机分为6组:溶剂对照组和对照组分别给予DMSO （0.2 ml/L）和生理盐水处理。实验组给予DMSO溶解并以生理盐水稀释的ST,使其终浓度分别为100、500、1000、2000μg/L,处理24 h后,采用Western blot和RT-PCR方法检测GES-1中JNK/p-JNK、ERK/p-ERK、p38/p-p38和PI3K/mTOR/p-mTOR表达的变化情况。另取对数生长期GES-1细胞,分别给予1μM SP600125 （JNK信号通路特异性阻断剂）、50μM PD98059 （ERK信号通路特异性阻断剂）、0.5μM SB203580 （p38信号通路特异性阻断剂）和1μM LY-294002 （PI3K特异性阻断剂）预处理。实验分为5组,即对照组、溶剂对照组、ST处理组、阻断剂组和阻断剂+ST处理组。细胞培养24 h后,更换2%低血清DMEM培养基。阻断剂组分别加入SP600125 （1μM）、PD98059 （50μM）、SB203580 （0.5μM）和LY-294002（1μM）。30 min后ST处理组和阻断剂+ST处理组分别给予1000μg/L ST,溶剂对照组和对照组分别给予DMSO （0.1ml/L）和生理盐水处理。细胞处理24 h后离心收细胞,采用Western blot方法检测目的基因在蛋白水平上表达变化。结果:1.1 ST对JNK信号转导通路的影响1.1.1不同浓度ST对JNK信号转导通路的影响Western blot结果显示,ST 100、500、1000、2000μg/L处理后细胞内JNK蛋白相对表达量与溶剂对照组比较差异无显著性（P>0.05）。而ST 500、1000、2000μg/L处理后JNK磷酸化水平明显高于溶剂对照组（P<0.05）,并且,在0～2000μg/L ST浓度范围内,JNK磷酸化水平与ST的处理浓度有明显剂量依赖关系（r=0.925, P<0.01, n=3）。RT-PCR方法检测发现,各ST处理组JNK mRNA相对表达量与溶剂对照组（P>0.05）相比,没有明显差别。1.1.2 SP600125预处理对ST作用后GES-1细胞JNK磷酸化水平的影响Western blot方法检测结果表明,SP600125组细胞JNK磷酸化水平明显低于溶剂对照组（P<0.05）,SP600125预处理+ST处理组JNK磷酸化水平较ST单独处理组明显降低,但仍高于溶剂对照组（P<0.05）,表明给予JNK阻断剂SP600125对JNK蛋白激酶具有特异阻断作用,但只能部分阻断ST对JNK信号转导通路的激活作用。1.2 ST对ERK信号转导通路的影响1.2.1不同浓度ST对ERK信号转导通路的影响Western blot结果显示,各ST处理组细胞ERK蛋白相对表达量与溶剂对照组比较无明显差异（P>0.05）。而ST 500、1000、2000μg/L处理后细胞内ERK磷酸化水平明显高于溶剂对照组（P<0.05）,并且,在0～2000μg/L ST浓度范围内,ERK磷酸化水平与ST的处理浓度有明显剂量依赖关系（r=0.887, P<0.01, n=3）。RT-PCR方法检测发现,各ST处理组细胞中ERK mRNA相对表达量与溶剂对照组相比,没有明显差别（P>0.05）。1.2.2 PD98059预处理对ST作用后GES-1细胞ERK磷酸化水平的影响Western blot方法检测,结果表明PD98059组细胞ERK磷酸化水平明显低于溶剂对照组（P<0.05）,给予PD98059预处理后,PD98059+ST处理组ERK的磷酸化水平较ST单独处理组明显降低,但仍高于溶剂对照组（P<0.05）。表明给予ERK阻断剂PD98059对ERK蛋白激酶具有特异阻断作用,但只能部分阻断ST对ERK信号转导通路的激活作用。1.3 ST对p38信号转导通路的影响1.3.1不同浓度ST对p38信号转导通路的影响Western blot结果显示,在0～2000μg/L ST浓度范围内,不同浓度ST处理后p38蛋白相对表达量与溶剂对照组比较均无明显差异（P>0.05）。ST 500、1000、2000μg/L处理后相对p38磷酸化水平明显低于溶剂对照组（P<0.05）,并且,在0～2000μg/L ST浓度范围内,p38磷酸化水平与ST的处理浓度呈明显负相关关系（r=-0.843, P<0.01, n=3）。RT-PCR方法检测发现,各ST处理组细胞内p38 mRNA相对表达量与溶剂对照组相比,均没有明显差别（P>0.05）。1.3.2 SB203580预处理对ST作用后GES-1细胞p38磷酸化水平的影响Western blot检测结果表明,SB203580处理组细胞相对p38磷酸化水平均明显低于溶剂对照组（P<0.05）,SP600125+ST处理组p38磷酸化水平较ST单独处理组明显降低（P<0.05）,表明p38阻断剂SB203580对p38的磷酸化水平具有特异阻断作用,给予p38特异性阻断剂SB203580预处理,对ST诱导细胞p38磷酸化水平降低有明显的协同作用。1.4 ST对PI3K/mTOR信号转导通路的影响1.4.1不同浓度ST对PI3K/mTOR信号转导通路的影响Western blot结果显示,各ST处理组细胞PI3K蛋白相对表达量与溶剂对照组相比没有明显差异（P>0.05）。1000、2000μg/L ST处理组细胞mTOR蛋白相对表达量明显高于溶剂对照组（P<0.05）,并且在0～2000μg/L ST浓度范围内,mTOR的蛋白表达与ST的处理浓度有明显剂量依赖关系（r=0.831, P<0.01, n=3）。同时,ST也可剂量依赖性地上调mTOR的磷酸化水平（r=0.868, P<0.01, n=3）,其中500、1000和2000μg/L ST处理组mTOR的磷酸化水平升高更明显（P<0.05）。RT-PCR方法检测结果发现,与溶剂对照组相比,不同浓度ST处理24 h对细胞内PI3K mRNA相对表达量没有明显影响（P>0.05）,但可以明显上调mTOR在mRNA水平上的表达,mTOR mRNA的相对表达量与ST的处理浓度呈明显正相关关系（r=0.831, P<0.01, n=3）。1.4.2 LY-294002预处理对ST作用后GES-1细胞mTOR基因表达及其磷酸化水平的影响Western blot方法检测,LY-294002组细胞mTOR及其磷酸化水平与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）,LY-294002+ST处理组mTOR磷酸化水平较ST单独处理组明显降低（P<0.05）,与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）;而mTOR蛋白的表达则明显高于溶剂对照组（P<0.05）,与ST单独处理组没有差别（P>0.05）。RT-PCR结果显示,LY-294002组细胞mTOR mRNA相对表达量与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）,LY-294002+ST处理组mTOR mRNA相对表达量明显高于溶剂对照组（P<0.05）,而与ST单独处理组相比没有明显差别（P>0.05）。结果表明,给予PI3K阻断剂LY-294002对PI3K/mTOR信号转导通路具有特异阻断作用,可以阻断ST诱导mTOR磷酸化水平升高的作用,但对mTOR在蛋白和mRNA水平上的表达没有明显影响。2 JNK、ERK和PI3K信号转导通路的激活在杂色曲霉素诱导GES-1细胞G2期阻滞中的作用研究目的:探讨JNK、ERK和PI3K信号转导通路特异性阻断剂预处理对ST处理24 h诱导体外培养GES-1细胞增殖抑制、G2期阻滞及其相关因子表达的影响。方法:取对数生长期GES-1细胞,分别给予1μM SP600125 （JNK信号通路特异性阻断剂）、50μM PD98059 （ERK信号通路特异性阻断剂）和1μM LY-294002 （PI3K特异性阻断剂）预处理细胞。按1×104个/L接种于96孔板,待细胞进入对数生长期后更换培养基,实验分为5组,即对照组、溶剂对照组、ST处理组、阻断剂组和阻断剂+ST处理组。每孔终体积为200μl,同时设空白对照孔、对照孔和溶剂对照孔,细胞培养24 h后,更换2%低血清DMEM培养基,阻断剂组分别加入SP600125 （1μM）、PD98059 （50μM）和LY-294002 （1μM）。30 min后ST处理组和阻断剂+ST处理组分别给予1000μg/L ST,溶剂对照组和对照组分别给予DMSO （0.1ml/L）和生理盐水处理。细胞处理24 h后,采用MTT检测细胞存活率。另取对数生长期GES-1细胞,分为5组,即对照组、溶剂对照组、ST处理组、阻断剂组和阻断剂+ST处理组（处理同上）。细胞处理24 h后离心收细胞,采用FCM检测细胞周期分布情况,采用Western blot和RT-PCR方法观察周期调控关键因子——CyclinB1蛋白的表达、Cdc2激酶和Cdc25C磷酸酶活性的变化情况。结果:2.1 JNK信号转导通路在ST诱导GES-1细胞G2期阻滞中的作用2.1.1 SP600125预处理对ST诱导的GES-1细胞存活率降低的影响MTT结果表明,SP600125+ST组细胞存活率明显高于ST单独处理组（P<0.05）,但仍明显低于溶剂对照组（P<0.05）。表明SP600125预处理可部分阻断ST对GES-1细胞增殖的抑制作用。2.1.2 SP600125预处理对ST诱导的GES-1细胞G2期阻滞的影响FCM检测结果显示,与ST 1 000μg/L处理组相比,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组G0/G1期所占比例明显升高;而G2/M期细胞比例则明显降低（P<0.05）,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。表明SP600125预处理可部分阻断ST诱导的细胞G2/M期比例增高作用。2.1.3 SP600125预处理对ST作用后GES-1细胞G2期相关因子的影响2.1.3.1 SP600125预处理对CyclinB1表达的影响Western blot检测结果显示,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinB1蛋白的表达明显低于溶剂对照组,同时显著低于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）。RT-PCR结果发现,SP600125预处理+ST组细胞内CyclinB1 mRNA的表达明显低于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有差别。表明SP600125预处理可阻断ST对GES-1细胞内CyclinB1在蛋白和mRNA水平表达的升高作用。2.1.3.2 SP600125预处理对Cdc2激酶的影响Western blot检测结果显示,与ST 1000μg/L处理组细胞相比,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组内Cdc2的去磷酸化水平明显升高,同时其磷酸化水平明显降低（P<0.05）,而与溶剂对照组相比无明显差别。RT-PCR结果表明,SP600125预处理+ST组细胞内Cdc2 mRNA的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差别（P>0.05）。表明SP600125预处理可阻断ST对GES-1细胞内Cdc2去磷酸化水平和Cdc2磷酸化水平的影响,但对Cdc2 mRNA没有明显影响。2.1.3.3 SP600125预处理对Cdc25C磷酸酶的影响Western blot检测结果显示,与溶剂对照组相比,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组内Cdc25C蛋白的表达明显升高,同时明显高于ST 1000μg/L处理组;而Cdc25C磷酸化水平则较ST 1000μg/L处理组明显降低（P<0.05）,与溶剂对照组相比没有明显差别。RT-PCR结果表明,SP600125预处理+ST组细胞Cdc25C mRNA的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差别（P>0.05）。表明SP600125预处理可阻断ST对GES-1细胞内Cdc25C的蛋白表达和Cdc25C磷酸化水平的影响,但对Cdc25C mRNA没有明显影响。2.2 ERK信号转导通路在ST诱导GES-1细胞G2期阻滞中的作用2.2.1 PD98059预处理对ST诱导的GES-1细胞存活率降低的影响MTT结果表明,PD98059+ST处理组细胞存活明显高于ST单独处理组（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）。表明PD98059预处理可以阻断ST对GES-1细胞的增殖抑制作用。2.2.2 PD98059预处理对ST诱导的GES-1细胞G2期阻滞的影响FCM检测结果显示,与ST 1000μg/L处理组相比,PD98029预处理+ ST 1000μg/L处理组S期细胞比例明显升高（P<0.05）;而G2/M期细胞比例明显降低（P<0.05）,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。表明PD98059预处理可部分阻断ST诱导的细胞G2/M期比例增高。2.2.3 PD98059预处理对ST作用后GES-1细胞G2期相关因子的影响2.2.3.1 PD98059预处理对CyclinB1表达的影响Western blot检测结果显示,PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinB1的蛋白表达与ST 1000μg/L处理组相比显著降低（P<0.05）,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。RT-PCR结果显示,PD98059预处理+ST组细胞内CyclinB1 mRNA的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差别（P>0.05）。表明PD98059预处理可部分阻断ST对GES-1细胞内CyclinB1蛋白表达的升高作用,但对CyclinB1 mRNA没有明显影响。2.2.3.2 PD98059预处理对Cdc2激酶的影响Western blot检测结果显示,PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组细胞内Cdc2的去磷酸化水平与ST 1000μg/L处理组相比,没有明显差异（P>0.05）;而其磷酸化水平则明显低于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）,与溶剂对照组相比没有明显差异（P>0.05）。RT-PCR结果显示,PD98059预处理+ST组细胞Cdc2 mRNA的表达明显低于ST 1000μg/L处理组,但仍高于溶剂对照组（P<0.05）。表明PD98059预处理可阻断ST对GES-1细胞内Cdc2磷酸化水平的升高作用,同时部分阻断ST对Cdc2 mRNA表达的升高作用。2.2.3.3 PD98059预处理对Cdc25C磷酸酶的影响Western blot检测结果显示,PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组细胞Cdc25C蛋白表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差异（P>0.05）;Cdc25C磷酸化水平则较ST 1000μg/L处理组明显降低,但仍高于溶剂对照组（P<0.05）。RT-PCR结果显示,PD98059预处理+ST组细胞内Cdc25C mRNA的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差别（P>0.05）。提示PD98059预处理可部分阻断ST对细胞内Cdc25C磷酸化水平的升高作用,但对Cdc25C mRNA没有明显影响。2.3 PI3K信号转导通路在ST诱导GES-1细胞G2期阻滞中的作用2.3.1 LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞存活率降低的影响MTT结果表明,LY-294002+ST处理组细胞存活率明显低于溶剂对照组（P<0.05）,而与ST单独阻断剂组相比没有明显差别（P>0.05）。表明LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞增殖抑制作用没有明显影响。2.3.2 LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞G2期阻滞的影响FCM检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组G0/G1期和S期细胞所占比例均较ST 1000μg/L处理组明显降低,而G2/M期细胞比例则明显增加（P<0.05）,表明LY-294002预处理对ST诱导的细胞G2/M期比例增高具有协同作用。2.3.3 LY-294002预处理对ST作用后GES-1细胞G2期相关因子的影响2.3.3.1 LY-294002预处理对CyclinB1表达的影响Western blot检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinB1蛋白的表达与ST 1000μg/L处理组相比显著降低,较溶剂对照组也明显降低（P<0.05）。RT-PCR结果显示,LY-294002预处理+ST组细胞内CyclinB1 mRNA的表达明显低于ST单独处理组,同时明显低于溶剂对照组（P<0.05）。表明LY-294002预处理可阻断ST诱导GES-1细胞内CyclinB1在蛋白和mRNA水平表达的升高作用。2.3.3.2 LY-294002预处理对Cdc2激酶的影响Western blot检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组细胞内Cdc2的去磷酸化水平与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差异（P>0.05）;而其磷酸化水平则明显高于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）,同时明显高于溶剂对照组（P<0.05）。RT-PCR结果显示,LY-294002预处理+ST组细胞Cdc2 mRNA的表达明显高于溶剂对照组,同时也明显高于ST单独处理组（P<0.05）。表明LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞内Cdc2的磷酸化水平及其mRNA表达升高有明显的协同作用。2.3.3.3 LY-294002预处理对Cdc25C磷酸酶的影响Western blot检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组细胞内Cdc25C蛋白的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差异（P>0.05）;而其磷酸化水平则较ST 1000μg/L处理组明显升高（P<0.05）,同时也明显高于溶剂对照组（P<0.05）。RT-PCR结果显示,LY-294002预处理+ST组细胞内Cdc25C mRNA的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差别（P>0.05）。表明LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞内Cdc25C磷酸化水平升高有明显的协同作用,但对Cdc25C在蛋白和mRNA水平上的表达没有明显影响。3 JNK、ERK和PI3K信号转导通路的激活在杂色曲霉素影响GES-1细胞蛋白质合成起始因子表达的作用研究目的:进一步探讨JNK、ERK和PI3K信号转导通路特异性阻断剂预处理,对ST处理24 h诱导体外培养GES-1细胞蛋白质合成障碍的影响。方法:实验细胞处理、分组（同前）。继续采用Western blot和RT-PCR方法研究了分别给予JNK、ERK和PI3K信号转导通路特异性阻断剂预处理,ST诱导的体外培养胃黏膜上皮细胞GES-1细胞中eIF4E和4E-BP1的表达及其活性变化,以及CyclinD1蛋白表达的变化情况结果:3.1 JNK信号转导通路在ST影响GES-1细胞蛋白质合成中的作用3.1.1 SP600125预处理对eIF4E表达的影响Western blot检测结果显示,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组细胞内eIF4E蛋白的表达与溶剂对照组相比明显下降,同时显著低于ST单独处理组（P<0.05）,而eIF4E磷酸化水平则明显高于溶剂对照组,同时显著高于ST单独处理组（P<0.05）。RT-PCR结果表明,SP600125预处理+ST组细胞内eIF4E mRNA的表达明显低于ST 1000μg/L处理组,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。表明SP600125预处理可阻断ST对GES-1细胞内eIF4E的活性抑制作用,同时可部分阻断ST对eIF4E mRNA表达的升高作用。3.1.2 SP600125预处理对4E-BP1表达的影响Western blot检测结果显示,SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组4E-BP1蛋白的表达明显低于ST单独处理组（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有明显变化（P>0.05）;4E-BP1磷酸化水平较溶剂对照组明显升高,同时显著高于ST单独处理组（P<0.05）。RT-PCR结果表明,SP600125预处理+ST组细胞内4E-BP1 mRNA的表达也明显低于ST单独处理组,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。表明SP600125预处理可阻断ST对GES-1细胞内4E-BP1活性的促进作用,同时可部分阻断ST对4E-BP1 mRNA表达的升高作用。3.1.3 SP600125预处理对CyclinD1蛋白表达的影响SP600125预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinD1蛋白的表达明显高于ST单独处理组,但仍明显低于溶剂对照组（P<0.05）,表明SP600125预处理可部分阻断ST对GES-1细胞内CyclinD1蛋白表达的降低作用。3.2 ERK信号转导通路在ST影响GES-1细胞蛋白质合成中的作用3.2.1 PD98059预处理对eIF4E表达的影响Western blot检测结果显示,PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组内eIF4E蛋白的表达与ST 1000μg/L处理组相比没有明显差异（P>0.05）,而其磷酸化水平与ST 1000μg/L处理组细胞相比明显升高（P<0.05）,而与溶剂对照组没有明显差别（P>0.05）。RT-PCR结果表明,PD98059预处理+ST组细胞内eIF4E mRNA的表达明显低于ST单独处理组（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有差别。表明PD98059预处理对ST诱导的GES-1细胞内eIF4E蛋白的表达增高没有影响;但可阻断ST对eIF4E磷酸化水平的降低以及eIF4E mRNA表达的升高作用。3.2.2 PD98059预处理对4E-BP1的影响Western blot检测结果显示,PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组4E-BP1蛋白的表达较ST单独处理组明显降低（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有明显差别;4E-BP1磷酸化水平与ST 1000μg/L处理组细胞相比也明显升高（P<0.05）,也与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）。RT-PCR结果表明,PD98059预处理+ST组细胞4E-BP1 mRNA的表达与ST单独处理组相比明显降低,但仍明显高于溶剂对照组（P<0.05）。表明PD98059预处理可阻断ST对GES-1细胞内4E-BP1蛋白的表达升高作用及4E-BP1磷酸化水平降低作用;同时可部分阻断4E-BP1 mRNA表达升高的作用。3.2.3 PD98059预处理对CyclinD1蛋白表达的影响PD98059预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinD1蛋白的表达明显高于溶剂对照组（P<0.05）,同时显著高于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）,表明PD98059预处理可阻断ST诱导GES-1细胞内CyclinD1蛋白表达降低的作用。3.3 PI3K信号转导通路在ST影响GES-1细胞蛋白质合成中的作用3.3.1 LY-294002预处理对eIF4E表达的影响Western blot检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组内eIF4E蛋白的表达明显高于溶剂对照组,同时明显高于ST单独处理组（P<0.05）;eIF4E的磷酸化水平较ST处理组明显降低（P<0.05）,同时明显低于溶剂对照组（P<0.05）。RT-PCR结果表明,LY-294002预处理+ST组细胞内eIF4E mRNA的表达明显高于溶剂对照组,并且也较ST单独处理组明显升高（P<0.05）。表明LY-294002预处理对ST诱导的eIF4E在蛋白和mRNA水平的表达升高及eIF4E磷酸化水平的降低均有明显的协同作用。3.3.2 LY-294002预处理对4E-BP1的影响Western blot检测结果显示,LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组内4E-BP1蛋白的表达明显低于ST单独处理组（P<0.05）,而与溶剂对照组相比没有明显差别（P>0.05）;4E-BP1磷酸化水平明显低于溶剂对照组（P<0.05）,同时较ST 1000μg/L处理组细胞也明显降低（P<0.05）。RT-PCR结果表明,LY-294002预处理+ST组细胞4E-BP1 mRNA的表达与ST单独处理组相比明显降低,但仍高于溶剂对照组（P<0.05）。表明LY-294002预处理可阻断ST对GES-1细胞内4E-BP1在蛋白和mRNA水平的表达升高作用,但对ST诱导的4E-BP1磷酸化水平降低有明显的协同作用。3.3.3 LY-294002预处理对CyclinD1蛋白表达的影响LY-294002预处理+ST 1000μg/L处理组CyclinD1蛋白的表达明显低于溶剂对照组（P<0.05）,同时显著低于ST 1000μg/L处理组（P<0.05）,表明LY-294002预处理对ST诱导的GES-1细胞内CyclinD1蛋白表达降低有明显的协同作用。结论:1杂色曲霉素作用于GES-1细胞24 h,可以激活JNK、ERK和PI3K信号转导通路,同时可以抑制p38信号转导通路。2杂色曲霉素可能通过激活JNK和ERK信号转导通路影响GES-1细胞周期分布,诱导G2期阻滞;但PI3K信号转导通路的激活在杂色曲霉素诱导的G2期阻滞中可能发挥反向调节作用。3杂色曲霉素作用于GES-1细胞可通过激活JNK、ERK和PI3K信号转导通路而影响Cdc25C -Cdc2/CyclinB1的表达和功能,可能是杂色曲霉素诱导细胞G2期阻滞的机制之一。4 JNK、ERK和PI3K信号转导通路的激活可能均参与了ST对体外培养胃黏膜上皮细胞GES-1的影响。但PI3K信号转导通路的激活此过程中可能主要发挥反向调节作用。
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- [1].QNL长期毒性研究[J]. 食品与药品 2012(11)
- [2].雷帕霉素逆转大鼠肺动脉高压的作用机制研究[J]. 中国当代儿科杂志 2015(07)
- [3].冰片对血脑屏障P-糖蛋白功能的影响[J]. 安徽科技学院学报 2015(02)
- [4].某品牌营养液增强免疫力功能实验研究[J]. 中国预防医学杂志 2008(08)
- [5].三氯乙烯致敏豚鼠体内循环免疫复合物的变化[J]. 中国工业医学杂志 2012(01)
- [6].桉叶油对小鼠胚胎发育影响的研究[J]. 时珍国医国药 2011(05)
- [7].创伤性脑损伤大鼠脑组织中α-酮戊二酸脱氢酶的活性变化及意义[J]. 新乡医学院学报 2020(04)
- [8].4种常见残留农药联合作用对小鼠免疫毒性研究[J]. 毒理学杂志 2016(01)
- [9].聚乙二醇化重组人改构白介素11对骨髓抑制的小鼠促血小板生成作用的评价[J]. 中国实验血液学杂志 2016(05)
- [10].染料木黄酮的诱变性研究[J]. 公共卫生与预防医学 2017(04)
- [11].华蟾素注射液心脏毒性评价[J]. 中国新药杂志 2020(13)
- [12].甘露醇诱导人肾小管上皮细胞的氧化应激作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2016(02)
- [13].改良型甲苯二异氰酸酯哮喘小鼠模型的建立[J]. 环境与健康杂志 2016(11)
- [14].黄蜀葵对实验性脂溢性脱发的影响初探[J]. 赣南医学院学报 2009(03)
- [15].维甲酸致小鼠畸形最佳剂量的探索[J]. 毒理学杂志 2014(03)
- [16].桉叶油对维甲酸致畸胎大鼠四肢骨骼发育的影响[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2014(04)
- [17].高尿酸对血管内皮细胞增殖凋亡作用及其机制研究[J]. 中国临床药理学杂志 2019(22)
- [18].不同特性纳米银致秀丽隐杆线虫毒性效应和氧化损伤作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2019(07)
- [19].MicroRNA-211-5p在阿尔茨海默病小鼠及细胞模型中表达分析[J]. 中华实用诊断与治疗杂志 2016(09)
- [20].骨髓间充质干细胞移植大鼠脑缺血区微血管密度和肝细胞生长因子的表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(32)
- [21].三氯乙烯致敏豚鼠肾脏丙二醛水平和超氧化物歧化酶活力变化[J]. 中国职业医学 2010(06)
- [22].肝靶向干扰素对小鼠免疫毒性的初步研究[J]. 中国生化药物杂志 2015(04)
- [23].“吴氏消瘤散”抗S180实体瘤及免疫调节作用的实验研究[J]. 上海中医药杂志 2014(03)
- [24].雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶向降解的实验研究[J]. 中华男科学杂志 2009(12)
- [25].桉叶油对环磷酰胺致大鼠胚胎毒性的保护作用[J]. 中国现代应用药学 2011(03)
- [26].大豆异黄酮对邻苯二甲酸二丁酯致小鼠遗传毒性的保护作用[J]. 营养学报 2008(02)
- [27].一种转化后的玉米赤霉烯酮产物对小鼠毒性研究[J]. 畜牧与兽医 2019(12)
- [28].纳米氧化铝致雄性小鼠生殖系统损害[J]. 毒理学杂志 2015(03)
- [29].六氟灵对兔眼氢氟酸灼伤应急洗消作用研究[J]. 中国职业医学 2014(02)
- [30].帕金森病大鼠模型纹状体中谷氨酸、γ-氨基丁酸与多巴胺之间的关系[J]. 神经解剖学杂志 2011(03)