晚期糖基化终产物对人肾小管上皮细胞的毒性作用及其机制的研究

论文摘要

【目的】研究晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）对人肾小管上皮细胞株HKC的细胞毒性作用,并探讨其可能的作用机制。【方法】1.葡萄糖与牛血清白蛋白（BSA）共同孵育制备成AGEs,用荧光分光光度计测定AGEs的荧光强度。2.以体外培养的HKC细胞为研究对象,采用MTT法测定不同浓度不同时间AGEs对HKC生长的抑制作用;应用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞的凋亡情况。3.RT-PCR法分析不同浓度AGEs处理HKC后其IL-1β,TNF-α,HMGB1 mRNA表达水平的变化。4.荧光分光光度计检测不同浓度AGEs处理HKC后细胞内活性氧（ROS）的含量,紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性。【结果】1.MTT结果显示,与对照组相比,AGEs均能显著抑制HKC细胞的增殖,且抑制作用具有时间和剂量依赖性。2.流式细胞仪分析发现,AGEs能促使HKC细胞发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度的增高而增加。DNA琼脂糖凝胶电泳观察到AGEs作用HKC细胞后出现典型的DNA梯行条带。3.RT-PCR方法检测显示,AGEs使HKC细胞IL-1β,TNF-α,HMGB1 mRNA的表达上调。4.AGEs作用HKC细胞后,ROS含量增高,SOD活性代偿性增高。【结论】1.AGEs对HKC细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现出良好的时效与量效关系。2.AGEs能促进HKC细胞的凋亡。3.AGEs对HKC细胞的毒性损害可能与上调IL-1β,TNF-α,HMGB1 mRNA表达有关。4.随着AGEs浓度的增高,ROS含量增高,SOD活性代偿性增高,提示AGEs对HKC细胞的毒性作用机制可能与细胞氧化应激有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 前言
• 一、晚期糖基化终产物
• 二、晚期糖基化终产物与糖尿病肾病
• 三、晚期糖基化终产物与炎症因子
• 四、晚期糖基化终产物与氧化应激
• 第一章 体外AGEs的制备和鉴定
• 1.材料和方法
• 2.实验结果
• 第二章 AGEs对HKC细胞增殖和凋亡的影响
• 1.材料和方法
• 2.实验结果
• 第三章 AGEs对HKC细胞IL-1β,TNF-α,HMGB1基因表达的影响
• 1.材料和方法
• 2.实验结果
• 第四章 AGEs对HKC细胞氧化应激指标的影响
• 1.材料和方法
• 2.实验结果
• 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 英文缩略词（Abbreviation）
• 在校期间发表文章
• 致谢