论文摘要
食物过敏被视为一种比较严重的公共营养问题,引起了人们的广泛关注。花生（Arachis hypogaea.L）是一种营养丰富的蛋白质资源。同时,在世界粮农组织（FAO,1995）报道的八大类食物过敏原中,花生是重要的过敏原。花生过敏具有低剂量致敏性,致死率高及终身伴随等特点,因而也被广泛研究。本研究采用Touch down PCR技术,从花生cDNA中克隆了花生过敏原iso-Ara h 3基因,结果获得两个克隆分别命名为PN32-8及PN32-20。通过序列测定及比对分析,初步确定所克隆基因为目的基因,并将目的基因连接到表达载体pET-44a上转化大肠杆菌进行诱导表达。经SDS-PAGE证实目的基因能表达58kDa的蛋白,同时利用Western blot技术对重组蛋白进行抗原性鉴定。结果显示,重组的iso-Ara h 3蛋白血清识别率为12.5%,与花生主要过敏原Ara h 3相比是一种弱过敏原性蛋白。最后结合生物信息学对重组蛋白进行抗原性分析,并在三维空间结构上成功实施单氨基酸虚拟改造。