以尿液中6β-羟基氢化可的松/氢化可的松比值评估CYP3A活性及对儿童个体化用药的指导

论文摘要

肝脏是药物代谢的主要场所,而肝脏进行生物转化则依赖于微粒体中的多种酶系,其中最重要的是细胞色素P4503A酶（CYP3A）。CYP3A在肝脏的含量极为丰富,是人体肝脏中最主要表达酶,也存在于在人体的其它部位,如肠、胃、食道、外周血液等。目前已经发现临床使用的众多药物都由CYP3A所催化代谢。由于CYP3A酶的影响因素较多,如遗传多态性、激素、年龄、机体状态、营养、疾病、吸烟、饮酒等,其中尤以药物能够显着影响该酶的活性,因此,为使患者获得最佳治疗效果,并避免药物不良反应,真正达到“用药个体化”的目的,需要测定CYP3A酶的活性。目前,CYP3A活性常用的测定方法有红霉素呼吸试验、咪唑安定法等,这些方法均需服用非治疗目的的化学药物。最近,有学者提出测定尿液中游离的氢化可的松（free cortisol,FC）及其代谢产物6β-羟基氢化可的松（6β-hydroxycortisol,6β-OHFC）的方法评价CYP3A酶的活性,因为其利用内源性物质,无需服用任何药物,可能是目前最安全、最简单的CYP3A酶活性测定方法。另一方面,通过尿液中6β-OHFC和FC的比值反映CYP3A酶的活性,还可改善现行根据血药浓度测定对人体造成的损伤性和方法的复杂性,为临床个体化用药提供一个更为简便、可靠的分析手段。本课题拟采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatographic,HPLC）测定尿液中6β-OHFC/FC的方法,首次对中国健康儿童肝药酶CYP3A活性进行大样本的筛查。同时,还对急性淋巴细胞白血病儿童进行探索,希望能为儿童的白血病个体化治疗提供理论基础。本文共分为四部分:第一部分运用HPLC方法测定尿液中6β-OHFC/FC,完成该方法的可行性、准确性评价。第二部分,通过尿液中6β-OHFC/FC的测定,对中国健康儿童肝药酶CYP3A活性进行大样本的筛查,对上海地区儿童的CYP3A活性分布有了较为客观和全面的数据。分析各种因素包括年龄、性别、青春期等对CYP3A活性的影响。第三部分,收集55例白血病患儿,通过对比化疗前后和不同疾病状态下6β-OHFC/FC比值,并且把国际通用作为白血病危险度及预后评估的重要指标微量残留病（Minimal residual disease,MRD）监测与6β-OHFC/FC比值联系起来,结果发现化疗对CYP3A活性有显着影响,并且CYP3A活性与治疗的结果有一定的相关性。提示白血病患儿临床上化疗前后CYP3A酶活性变化与患儿体内某些药物动力学参数有一定的相关性。第四部分,以依托泊苷（Etoposide,VP16）为例,研究不同药酶活性下VP16的血药浓度和半衰期是否存在相关性。结果药酶活性与VP16的血药浓度无相关性,而半衰期跟药酶活性相关,提示药酶活性会影响到VP16的代谢与排泄,关注给药频次的调整将影响到VP16的稳态血药浓度。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 高效液相色谱法测定尿中氢化可的松和6B-羟基氢化可的松的含量比值作为CYP3A活性指标的探索
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 仪器
• 2 方法
• 2.1 样品处理
• 2.2 色谱条件
• 2.3 标准曲线的制备
• 2.4 统计方法
• 3 实验结果
• 3.1 HPLC方法测定6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的专一性
• 3.2 回收率和精密度测定
• 3.3 稳定性实验
• 4 结论和讨论
• 第二部分 儿童肝药酶CYP3A活性的影响因素研究
• 1 仪器与材料
• 1.1 仪器
• 1.2 材料
• 2 资料与方法
• 2.1 健康儿童受试者的收集
• 2.2 样本的收集及处理
• 2.3 样本的测定
• 2.4 酶活性计算及数据分析
• 3 结果
• 3.1 健康儿童CYP3A的分布特征
• 3.2 CYP3A正常值估计
• 3.3 与文献研究的比较
• 3.4 不同年龄组中CYP3A酶活性
• 3.5 青春期发育对CYP3A的影响
• 3.6 性别对CYP3A活性的影响
• 4 讨论和结论
• 第三部分 儿童白血病患者肝药酶CYP3A活性影响因素研究
• 1 仪器与材料
• 2 资料与方法
• 2.1 白血病病例的选择及标本的收集
• 2.2 样本的测定
• 2.3 酶活性计算及数据分析
• 3 结果
• 3.1 化疗前后对CYP3A活性的影响
• 3.2 白血病患儿与健康儿童间CYP3A活性差异
• 3.3 患儿不同化疗阶段中6β-OHC/FC比较
• 4 讨论和结论
• 第四部分:CYP3A活性对急性淋巴细胞白血病儿童抗肿瘤药物VP16疗效和预后的相关性研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 资料与方法
• 2.1 病例的选择及标本的收集
• 2.2 患者CYP酶活性测定
• 2.3 患者CYP酶活性计算
• 2.4 VP16浓度测定
• 3 结果
• 4 讨论和结论
• 总结
• 参考文献
• 综述:CYP酶与个体化用药的实现
• 攻读硕士学位期间发表论文及所获得基金资助
• 致谢
• 本文中英文缩写