调节TLR3及其信号转导通路抑制宫颈癌细胞生长的体外研究

论文摘要

目的探索TLR3/PI3K及其信号转导通路在宫颈癌中的作用及Hela细胞中HPV18E6/E7与TLR3/PI3K信号转导通路的关系,调节TLR3及其信号转导通路抑制宫颈癌细胞的生长,从而为阐明宫颈癌发病机制及探索治疗宫颈癌的新靶点提供理论及实验依据。方法1.以RT-PCR和Western blot法检测Hela细胞TLR3、PI3K的mRNA和蛋白表达水平,明确TLR3/PI3K信号转导通路在宫颈癌中的作用。2.利用课题组前期合成的以慢病毒为载体针对HPV18E6E7基因的siRNA转染HeLa细胞,以RT-PCR和Western blot法检测Hela细胞TLR3、PI3K的mRNA和蛋白表达水平改变。3.MTT法检测调节TLR3及其细胞信号转导通路对宫颈癌细胞的生长增殖或抑制作用。结果1. Hela细胞中TLR3、PI3K的mRNA表达分别水平为（43.98±1.60）、（35.19±8.09）, TLR3、PI3K蛋白表达水平分别为（89.98±3.10）、（85.77±3.79）。以polyI:C刺激Hela细胞,可见Hela细胞中TLR3、PI3K的mRNA表达水平增高,分别为（71.34±0.70）、（69.69±4.09）,蛋白表达水平也增高,分别为（80.18±4.37）、（72.18±1.66）,差异均有统计学意义（P<0.001,P<0.001；P=0.009,P=0.001）。polyI:C可刺激Hela细胞生长,细胞增殖率为（20.54±4.21）%。2.当以polyI:C刺激的同时给予LY94002抑制时,Hela细胞中TLR3、PI3K的mRNA表达水平明显降低,分别为（28.63±2.38）、（22.69±3.82）,差异分别具有统计学意义（P<0.001;P=0.025）。TLR3、PI3K蛋白表达水平下降,分别为（70.42±1.03）、（63.26±1.53）,差异分别具有统计学意义（P=0.009；P=0.005）。LY294002组可抑制宫颈癌细胞生长,肿瘤细胞生长抑制率为（61.92±5.49）%。3.慢病毒转染组细胞HPV18E6、TLR3、PI3K的mRNA表达水平分别为（0.1360±0.0140）、（0.2367±0.0321）、（0.2013±0.0461）,对照组细胞HPV18E6、 TLR3、PI3K的mRNA表达水平分别为（0.392+0.036）、（0.4700±0.0346）、（0.3767±0.0321）,转染组HPV18E6、TLR3、PI3K的mRNA表达水平分别低于对照组,差异均具有统计学意义（P<0.001；P0.001;P=0.005）。4.慢病毒转染组细胞HPV18E6、TLR3、PI3K的蛋白表达水平为（0.1670±0.0290）、（0.6834±0.0173）、（0.5670±0.0440）,对照组细胞HPV18E6、TLR3、PI3K的蛋白表达水平分别为（0.2860±0.0370）、（0.8743±0.0263）、（0.7599±0.0403）。转染组HPV18E6、TLR3、PI3K的蛋白表达水平分别低于对照组,差异均具有统计学意义（P=0.005；P0.002;P0.005）。5.转染组肿瘤细胞生长抑制率为（39.6±18.0）%,与对照组相比,转染组细胞生长受到明显抑制,差异具有统计学意义（P=0.047）。结论1. TLR3/PI3K信号转导通路在宫颈癌细胞生长中有重要作用,抑制TLR3信号通路,可有效抑制宫颈癌Hela细胞的生长。2. TLR3/PI3K信号转导通路在HPV18E6/E7介导宫颈癌细胞转化及生长中发挥重要作用,抑制HPV18E6/E7表达能在mRNA和蛋白水平有效下调TLR3/PI3K的表达,从而抑制宫颈癌Hela细胞的生长。3.TLR3信号转导通路可望成为治疗宫颈癌的新靶点。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 1 对象和方法
• 1.1 实验对象
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 相关试剂及耗材
• 1.1.3 主要液体配制
• 1.1.4 主要器材
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 细胞培养与传代
• 1.2.2 细胞分组及加药
• 1.2.3 慢病毒载体转染Hela细胞
• 1.2.4 MTT法检测Hela细胞生长情况
• 1.2.5 RT-PCR法检测Hela细胞TLR3、PI3K mRNA的表达
• 1.2.6 Western Blot法检测各组细胞TLR3、PI3K在蛋白水平表达
• 1.3 统计学方法
• 2 结果
• 2.1 Hela细胞TLR3、PI3K表达及polyI：C、LY94002对其表达的调节
• 2.1.1 Hela细胞TLR3、PI3K mRNA表达及polyI：C、LY294002对其表达的影响
• 2.1.2 Hela细胞TLR3、PI3K蛋白表达及polyI：C、LY94002对其表达的影响
• 2.2 调节Hela细胞TLR3、PI3K表达对肿瘤细胞生长的影响
• 2.3 慢病毒携带目的siRNA转染Hela细胞对HPV18 E6、TLR3、PI3K表达的影响
• 2.3.1 慢病毒转染对Hela细胞HPV18 E6、TLR3、PI3K mRNA表达的影响
• 2.3.2 慢病毒转染对Hela细胞HPVE6、TLR3、PI3K蛋白表达的影响
• 2.4 慢病毒转染对Hela细胞生长的影响
• 3 讨论
• 3.1 TLR3信号转导通路
• 3.1.1 TLR3简介
• 3.1.2 TR3的定位、结构及其配体
• 3.1.3 TLR3/PI3K信号转导途径
• 3.2 HPV致癌机理
• 3.2.1 HPV E6的致癌作用
• 3.2.2 HPV E7的致癌作用
• 3.2.2.1 HPV E7与
• 3.2.2.2 HPV E7 与 P600
• 3.2.3 抑制HR-HPV E6/E7对宫颈癌细胞生长的影响
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢