论文摘要
目的:为建立卵巢癌细胞向腹膜转移的体外黏附、迁移、侵袭模型。建立原代人腹膜间皮细胞培养法,并证实腹膜间皮细胞中部分细胞因子的表达,及其对卵巢癌SKOV3细胞黏附、迁移、侵袭力的影响。方法:用0.25%胰酶+0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）消化人大网膜组织,经去除红细胞后培养。在培养过程中以倒置显微镜观察细胞形态变化;HE染色观察细胞形态,并计算细胞纯度;扫描电子显微镜(（SEM）观察细胞超微结构;免疫细胞组织化学法鉴定细胞;免疫细胞化学法证实腹膜间皮细胞中部分细胞因子的表达;黏附迁移侵袭实验观察其对SKOV3细胞黏附、迁移、侵袭力影响。结果:分离培养的细胞为多角形,汇合时呈铺路石样排列;培养细胞的纯度达95%以上;SEM下见细胞表面大量的微绒毛;免疫组化显示;细胞角蛋白、波形蛋白抗原阳性,白细胞CD45、第Ⅷ因子相关抗原阴性。所有被鉴定特征均符合间皮细胞的特点。氢化可的松（0.5% ）、胰岛素（20μg/ml）对间皮细胞的生长有明显的促进作用。免疫细胞化学法证实腹膜间皮细胞中表达CXCL12、MSLN,不表达CXCR4。黏附实验观察发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞的黏附力。侵袭迁移实验发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞迁移、侵袭力。结论:胰酶+EDTA消化法是一种简单、高效、重复性高的分离腹膜间皮细胞的方法。RPMI-1640、25%小牛血清、0.5%氢化可的松、20μg/ml胰岛素是培养间皮细胞有效且廉价的配方。证实腹膜间皮细胞中表达CXCL12、MSLN,不表达CXCR4。黏附实验观察发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞的黏附力。侵袭迁移实验发现腹膜间皮细胞增强了SKOV3细胞迁移、侵袭力。
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