论文摘要
2’-脱氧腺苷是一种天然的脱氧核苷,它既是生化药物和基因工程研究的重要原材料,又是生产抗肿瘤和抗病毒核苷类药物（克拉曲滨等）的重要中间体,因此在市场上有广泛需求。化学合成法合成2’-脱氧腺苷需要一些基团的保护与去保护以及糖基的活化反应,其步骤过于复杂,且得到的一对对映异构体需要拆分；与传统的化学合成方法相比,微生物转化法具有选择性高、条件温和、成本低和污染小等特点,因此2’-脱氧腺苷的微生物转化研究非常有意义。本文通过筛选得到一株2’-脱氧腺苷的高产菌株—乙酰短杆菌HE-4。首先对HE-4摇瓶培养条件进行了优化,得到最佳发酵培养基配方为：葡萄糖0.2%、玉米浆3.0%,氯化铵0.5%,磷酸氢二钾0.3%,硫酸镁0.075%,氯化钠0.4%,pH7.2；最佳发酵条件为：发酵温度37℃,种子培养16h后按3%接种量接入发酵培养基,发酵培养基采用lOOmL/500mL装液量,于转速210r/mi n时培养24h,菌量比原来提高了一倍多。为得到大量菌体进行下。步转化实验,在摇瓶发酵的基础上进行10L放大实验,得到发酵罐的最佳培养条件为：温度33℃,恒定的pH 6.9,通气量适中约7.5L/mi n,发酵罐培养略优于摇瓶培养。得到高产稳定的菌体后优化转化反应条件,最佳转化条件为：反应温度58℃,菌体添加量6%,转化pH7.2,磷酸盐浓度30mmol/L,反应时间8h,底物比率（A/dT）125%,dT浓度72.8mmol/L,反应转速60r/min,添加0.003%的MnSO4。最后对产物的分离纯化进行了探索,流程如下：将初步处理后的生物转化液用D101柱进行柱层析,上样流速为2.0 mL/min,洗脱剂依次为4.5 BV 0.1mol/L的Na2CO3水溶液、3BV 30%乙醇,流速1.5mL/min,可得到纯度78.7%的dA洗脱液,收率93.9%,将得到的洗脱液进行结晶、重结晶,产品纯度可达99%以上,纯化收率82%。