油菜异附加系中萝卜染色体分子标记及定位研究

论文摘要

分子连锁群是生物染色体在分子水平上的反映,建立分子连锁图谱同染色体之间的对应关系,把分子连锁群归属到相应的染色体上,是构建分子图谱之后十分重要的工作。本研究利用（dp）RAPD分子标记技术鉴定筛选甘蓝型油菜异附加系（Raphanobrassica）中外源萝卜（Raphanus sativus）9对染色体（A-I）的特异分子标记,通过作图将萝卜染色体特异分子标记定位于萝卜分子连锁图谱,建立了连锁群与染色体之间的对应关系,达到完善萝卜分子连锁图谱目的。 试验共筛选了581个随机引物（组合）,结果有413个（占71.7%）随机引物（组合）扩增出899个萝卜染色体（A-I）特异的分子标记,其中有116个在萝卜对根结线虫表现为抗和感的两个亲本间表现为多态,从中选择质量最好的29个多态性染色体特异分子标记进行萝卜连锁群定位分析,结果有18个代表萝卜9对染色体（A-I）的特异分子标记分别定位于9个分子连锁群,分子连锁群1,2,3,4,5,6,7,8,9分别对应萝卜染色体A,F,I,E,G,H,D,C,B,从而建立了萝卜染色体与连锁群之间——对应的关系。 本研究首次报道了萝卜分子连锁群与染色体之间的归属关系,并验证了本研究室用QTL分析定位有抗根结线虫基因HsIRaph的7号连锁群,和用染色体附加系方法获得的对根结线虫抗性基因来自萝卜D染色体结论的一致性。该结果对萝卜基因组研究、抗根结线虫育种和将萝卜抗根结线虫基因转入其它作物的研究将会起到重要的指导作用。

论文目录

• 第一章 引言
• 1 芸薹属作物的远缘杂交研究
• 1.1 芸薹属及其近缘属主要物种间的亲缘关系
• 1.2 远缘杂交在芸薹属作物改良中的应用研究
• 1.3 通过芸薹属近缘属间杂交获得本研究的试材
• 2 外源染色体（质）的鉴定研究
• 2.1 形态标记
• 2.2 细胞学标记
• 2.3 生化标记
• 2.4 原位杂交
• 2.5 分子标记
• 3 本研究的目的与意义
• 第二章 甘蓝型油菜异附加系中外源萝卜染色体特异分子标记的筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.1.1 DNA提取材料
• 1.1.2 主要试剂与仪器
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 DNA提取
• 1.2.2 RAPD扩增体系
• 1.2.3 dpRAPD扩增体系
• 1.2.4 扩增产物的分离与显色
• 1.2.5 数据整理分析
• 2 结果与分析
• 2.1 应用Genetic Analyzer进行dpRAPD分析
• 2.2 dpRAPD的分析效率
• 2.2.1 RAPD与dpRAPD检测萝卜染色体特异分子标记的频率
• 2.2.2 萝卜染色体特异片段谱带的质量
• 2.2.3 dpRAPD产生的特异标记与相应的RAPD标记的重复率
• 2.2.4 扩增片段大小
• 2.3 引物的筛选
• 2.4 萝卜染色体（A-I）的特异标记
• 3 讨论
• 3.1 RAPD标记的可靠性
• 3.2 分子标记（RAPD）技术在鉴定外源染色体中的应用
• 3.3 dpRAPD分子标记技术的优越性
• 第三章 甘蓝型油菜异附加系中外源萝卜染色体特异分子标记的定位
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 萝卜染色体特异分子标记在萝卜亲本间的多态性检测
• 2群体的分离与分析'>1.2.2 多态性染色体特异标记在F₂群体的分离与分析
• 1.2.3 萝卜染色体特异分子标记在连锁群的定位
• 2 结果与分析
• 2.1 萝卜染色体特异分子标记在萝卜亲本间的多态性
• 2群体的分离'>2.2 多态性染色体特异分子标记在F₂群体的分离
• 2.3 萝卜染色体特异分子标记的定位
• 2.3.1 萝卜染色体特异分子标记的作图
• 2.3.2 萝卜染色体特异分子标记在连锁群上的分布
• 2.3.3 萝卜染色体与其连锁群间的对应关系
• 3 讨论
• 3.1 附加系外源萝卜染色体分子标记在萝卜亲本间的多态性
• 3.2 RAPD技术应用于分子连锁群的染色体定位
• 3.3 建立分子连锁群与染色体对应关系的重要意义
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢