两株苦楝内生真菌混合发酵的初步研究

论文摘要

近年来,植物内生真菌由于能够产生与宿主相同或相似的活性成分,已成为微生物领域的研究热点。随着各种各样的癌症和对药物具有抗性的病原菌的出现,人类的健康受到严重的威胁,人们更加渴望获得更多新型、疗效更为显著的天然药物。由于自然资源有限,人们把目光转向了寄生于植物体内的内生真菌。植物内生真菌已成为寻找具有新颖化学结构及生物活性的新资源。苦楝是楝科楝属落叶乔木,在我国分布最广,具有“天然杀虫剂”之美誉。楝科植物中含有多种杀虫活性物质,与自然环境有很好的相容性,是作为无公害生物型杀虫剂的理想植物资源。因此苦楝内生真菌的研究对生物农药的开发有着极其重要的意义。本论文是以两株苦楝内生真菌LN-14和LN-15为对象,研究其混合发酵的次生产物代谢产物的结构和生物活性。旨在探索从微生物中获得新颖天然产物的技术与手段,寻求具有抗老年痴呆的活性物质,为进一步开发苦楝和其内生真菌资源提供理论依据。本论文通过优化工艺,得出LN-14和LN-15的混合发酵条件:接种比例和接种量:LN-14 2%:LN-15 2%;接种顺序:先接LN-15,24h后接入LN-14,接种时间10-14h;液体培养基水平:马铃薯200g/L和葡萄糖20g/L;28℃,120r/min,发酵周期:4d。混合发酵60L。得发酵液乙酸乙酯浸膏（12.6g）和菌丝体乙酸乙酯浸膏（48g）。利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20、RP-18柱层析等方法对其进行分离纯化,得到了6个化合物。经理化性质和波谱（EI-MS、1H-NMR、13C-NMR）鉴定,以及与标准化合物对照,确定其中两个化合物:醋酸孕双烯醇酮和3,4,8-trimethyl-2,3,3a,4,5,5a,6,9-octahydro-1H-cyclopenta[c]inden-9-ol。其中后者首次从天然产物中分离得到。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 苦楝植物研究进展
• 1.1.1 苦楝的分类及分布
• 1.1.2 苦楝的生物活性及其化学成分
• 1.1.3 川楝素的作用机理
• 1.1.4 苦楝资源开发利用
• 1.2 内生真菌的研究概况
• 1.2.1 内生真菌的起源及其生物多样性
• 1.2.2 药用植物内生真菌次生代谢产物的多样性
• 1.2.3 苦楝内生真菌研究现状
• 1.3 混合发酵的研究进展
• 1.3.1 混合发酵的悠久历史
• 1.3.2 混合发酵的应用
• 1.4 立题的意义及依据
• 第二章 材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试菌种
• 2.1.2 培养基和培养条件
• 2.1.3 供试病原菌
• 2.1.4 试剂
• 2.1.5 仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 筛选培养基, 活化内生真菌
• 2.2.2 对峙法测LN-14 和LN-15 的共生性
• 2.2.3 筛选接种方法
• 2.2.4 种子液制备和确定接种时间
• 2.2.5 筛选单菌接种量
• 2.2.6 确定接种顺序
• 2.2.7 确定发酵周期
• 2.2.8 粗筛液体培养基的营养水平
• 2.2.9 筛选营养水平和接种比例
• 2.2.10 抑菌活性的测定
• 2.2.11 混合发酵及活性成分的提取
• 2.2.12 发酵产物的分离纯化
• 2.2.13 化合物均质性检测
• 2.2.14 单体化合物结构鉴定
• 第三章 结果与分析
• 3.1 优化发酵条件
• 3.1.1 LN-14 与LN-15 的关系
• 3.1.2 接种方法
• 3.1.3 种子液和接种时间
• 3.1.4 单菌接种量
• 3.1.5 接种顺序
• 3.1.6 发酵周期
• 3.1.7 粗筛液体培养基的营养比例
• 3.1.8 营养水平和接种比例
• 3.2 抑菌活性的测定
• 3.3 单体化合物均质性检测
• 3.4 化合物结构解析
• 3.4.1 化合物W-4 的结构鉴定
• 3.4.2 化合物W-6 的结构鉴定
• 3.4.3 其他化合物的结构鉴定
• 第四章 分析与讨论
• 4.1 内生真菌的鉴定
• 4.2 菌种的培养
• 4.3 发酵条件的优化
• 4.4 抑菌活性的测定
• 4.5 化合物的分离纯化
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介